产surfactin枯草芽胞杆菌168重组菌株构建及其对黄瓜枯萎病的控制作用

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1、密级：论文编号:中囯农业科学院学位论文产surfactin枯草芽胞杆菌168重组菌株构建及其对黄瓜枯萎病的控制作用ConstructionofSurfactinProducingStrainofBacillussubtilis168andItsControlEffectonCucumberFusariumWilt硕士研究生：高毓晗指导教师：郭荣君副研究员申请学位类别：农学硕士专业：植物病理学研宄方向：植物病害生物防治培养单位：植物保护研宄所研宄生院2015年4月中国农业科学院硕士学位论文评阅人、答辩委员会签名表产surfactinIVi草芽孢打菌168重组菌株

2、构建及K对黄瓜枯萎病的控论文题丨丨制作川植物病害生论文作者尚毓丨丨欠专业拟物病理学研究力向物防治指导教师郭荣君培养单位（研究所）植物保护研究所硕（博）姓名职称单位专业签名导师评硕异匚中ra农业科学院植物齐方军研究员梢物病理学保护研究所IXJ硕导□人杨家容教授两北农林科技大学棺物病理学aM1:琦教授博和屮国农业人学植物病理学T.席个兴红研究Q防导□北京啦农林科学院植物病理学i—中闺农业科学院植物蒋細良研究员丨铧f□牛物防治学保护研究所中a农业科学院植物邱德文研究员博导口牛物防治学保炉研究所if/教屮w农业科学院植物何M「41研究M_:和植物病理学保护研究所委11

3、m:八:义(.秘书）黄晓庆论文答辩时_地点中11中心30〗会议室上午9:00密级:论文编号:中国农业科学院学位论文产surfactin枯草芽胞杆菌168重组菌株构建及其对黄瓜枯萎病的控制作用ConstructionofSurfactinProducingStrainofBacillussubtilis168andItsControlEffectonCucumberFusariumWilt硕士研究生：高毓晗指导教师：郭荣君副研究员申请学位类别：农学硕士专业：植物病理学研究方向：植物病害生物防治培养单位：植物保护研究所研究生院2015年4月Secrecy:No.C

4、hineseAcademyofAgriculturalSciencesDissertationConstructionofSurfactinProducingStrainofBacillussubtilis168andItsControlEffectonCucumberFusariumWiltM.S.Candidate：GaoYuhanSupervisor：GuoRongjun,AssociatedProfessorMajor：PlantPathologySpecialty:BiocontrolofPlantDiseasesApril2015独创性声明本人声明

5、所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中国农业科学院或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：时间：2015年6月1日关于论文使用授权的声明本人完全了解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定，即：中国农业科学院有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业科学院可

6、以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。摘要黄瓜枯萎病是由尖孢镰刀菌黄瓜专化型Fusariumoxysporumf.sp.cucumerinum(Foc)引起的危害严重的土传病害。防治黄瓜枯萎病的高效菌株枯草芽胞杆菌B006可产生脂肽类抗生素表面活性素surfactin和芬枯草菌素fengycin。前人研究证明脂肽类表面活性素surfactin通过促进芽胞杆菌生物膜形成以及在植物根部的定殖、诱导植物产生系统抗性等发挥生防作用。但对于surfactin是否能够抑制根际病原菌的侵染和在植株内的蔓延来控制病害的发生和发展尚缺乏依据。本研究首先从生

7、防芽胞杆菌B006菌株中克隆了编码4’-磷酸泛酰巯基乙胺转移酶Sfp的sfp基因并连接到载体pDG1730上，并通过同源重组的方法将该基因整合到不产生surfactin的模式菌株B.subtilis168（B168）基因组中。转化子于1%淀粉平板和5%血平板初步筛选，获得不水解淀粉并产生溶血圈的重组菌株B168S。采用HPLC-ESI-MS对B168S在牛肉膏蛋白胨培养液中培养48h后的surfactin进行检测，证明B168S可产生surfactin，sfp基因重组菌株构建成功。对重组菌株B168S和B168的生物学特性的测定表明：B168和B168S在黄瓜

8、根系分泌物培养基上菌落形态略有差异，B