丹参毛状根中酚酸类和酮类成分合成途径中bhlh和wd40转录因子的调控

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1、ZSTUZhejiangSci-TechUniversity硕士学位论文Master’sThesis中文论文题目：丹参毛状根中酚酸类和酮类成分合成途径中bHLH和WD40转录因子的调控英文论文题目：RegulationofphenolicacidsandtanshinonesbiosynthesisbybHLHandWD40transcriptionfactorsinSalviamiltiorrihizaHairyRoots学科专业：生态学作者姓名：邢丙聪指导教师：梁宗锁教授完成日期：二零一五年六月浙江理工大学学位论文独创性声明本人声明所呈交的学

2、位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人巳经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得浙江理工大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均巳在论文中作了明确的说明并表不谢意。学位论文作者签名：签字曰期：年/月《曰学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解浙江理工大学有枳保留并向围索右类部门或机构送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权逝连星王太堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩

3、印或扫描等复制手段倮存、汇编学位论文。(倮密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：签字日期：年<月f日导师签名：签字日期：>o�年丨月牙日硕士学位论文丹参毛状根中酚酸类和酮类成分合成途径中bHLH和WD40转录因子的调控作者姓名邢丙聪学科(专业)生态学指导老师梁宗锁教授所在学院生命科学学院提交日期二零一五年六月中国杭州ZHEJIANGSCI-TECHUNIVERSITYMASTERDISSERTATIONRegulationofphenolicacidsandtanshinonesbiosynthesisbybHLHandWD40tr

4、anscriptionfactorsinSalviamiltiorrihizaHairyRootsBingcongXingDirectedbyDr.Zong-suoLiang,ProfessorCollegeofLifeSciences,ZhejiangSci-TechUniversityJun,2015HANGZHOU,CHINA项目资助本研究受“国家自然科学基金”（81373908）“MYB转录因子对丹参酚酸类成分合成的调控作用及其机理研究”的资助。浙江理工大学硕士学位论文丹参毛状根中酚酸类和酮类成分合成途径中bHLH和WD40转录因子的调控

5、摘要丹参（SalviamiltiorrhizaBunge）是我国传统中草药，由于其对心脑血管疾病的预防和治疗效果显著而被广泛关注。丹参中含丹酚酸和丹参酮，为其药效成分，由于需求量的增大，丹参药材品质也越来越受到重视，对于如何增加丹参中有效成分含量，进而提高丹参药材品质已然成为当下研究热点。本研究以丹参毛状根为材料，对丹参酚酸类及丹参酮类成分的代谢调控机制进行了探讨。1.利用终浓度为15µmol·L-1银离子（Ag+）和100µmol·L-1茉莉酸甲酯（MeJA）两种诱导子分别对培养18天的丹参毛状根进行诱导处理，分别在处理后第1、2、3、6、9天

6、采集样品；利用高效液相色谱（HPLC）对毛状根中丹酚酸类和丹参酮类成分含量进行检测，并采用实时定量PCR（RT-qPCR）对丹参酚酸类和丹参酮类成分代谢途径上关键酶基因表达进行检测。结果显示两种诱导子处理后，丹参酮和丹酚酸两类成分含量都发生了变化，相应基因表达也都得到了提高。Ag+显著增加了迷迭香酸（RA）、阿魏酸和咖啡酸的含量，但对丹参素（DSU）和丹酚酸B（LAB）的生物合成却起到了抑制作用，总酚酸含量变化不大；而四种丹参酮成分含量全部得到提高，总的丹参酮含量也显著增加。说明相对于酚酸类成分，丹参酮类成分对于Ag+的诱导更加敏感。经MeJA处

7、理后，丹参毛状根中各种丹酚酸类成分含量显著增加，特别是RA和LAB，总酚酸含量也明显提高；对丹参酮Ⅰ（TⅠ）的代谢积累影响不大，并且抑制了丹参酮ⅡA（TⅡA）的生物合成，但是显著促进了隐丹参酮（CT）和二氢丹参酮Ⅰ（DTⅠ）代谢积累，总的来说对丹参酮类含量影响效果不明显。Ag+和MeJA处理后丹酚酸类和丹参酮类代谢关键基因表达都受到了影响，说明Ag+和MeJA是通过影响了整个代谢途径上的相关基因进而对次生代谢产物合成产生影响。对于丹参酮类代谢途径来说，MEP途径对于两种诱导子的响应明显强于MVA途径。2.利用同源克隆法及文库筛选法从丹参中获得了b

8、HLH和WD40转录因子的基因序列各4个，分别命名为SmbHLH7、SmbHLH8、SmbHLH9、SmbHLH10、SmWD40-2、