中蜂囊状幼虫病毒（csbv）结构蛋白的优化表达及其免疫原性比较

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1、１０１６０Ｓ８９５１＋３３单位代码：分类号．２０１２２００４４学号：？ｆ鲁審榜硕±学位论文题目：中蜂囊状幼虫病毒（ＣＳＢＶ）结构蛋白的优化表达及其免疫原牲比较＇Ｃｏｄｏｎｏｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｅｘｒｅｓｓｉｏｎｉｎｐ，ｐＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｉｌａｎｄｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙｏｆＣＳ巨Ｖ生；张咯淳’研究＊：导师：曲祖乙＇’．？学科专业：微生物拳、一：２０１３２．论文课题起止时间年４月０１５年３月，＿ｉ

2、ｉ＂２０１５：！ｉ仑文完成日寸间年３月：－ｆｃｉ．４ｉ辽宁医学院研究生学位论文独创性声明本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工Ｌ作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加义标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含一为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明井表示谢意。之处一申请学位论文与资料若有不实，本＾承提切相关责任。论文作者签名＂子’：辟期：Ｖ込宁医学院研究生学位论文版权使用

3、授权书本人完全了解巧宁医学院有关保护知识产权的规定，即：研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属巧宁医学院。本人保证毕且业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为巧宁医学院，导师为通讯作者，通讯作者单位亦署名為巧宁医学院。学校有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。学校可１＾乂公布学位论文的全部或部分内容（保密内容除外），Ｌ乂采用影印、缩印或其他手段保存论论文。文作者签名：＾指导教师签秦：Ｖ如；目录一、摘要中文论著摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文论著摘要⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯2二、英文缩略语⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5三、论文前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6实验材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯27讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯36结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯38四、本研究创新性的自我评价⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯39五、参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯40六、附录综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

5、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯42在校期间科研成绩⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯57致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯58个人简介⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯59附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯60·中文论著摘要·中蜂囊状幼虫病毒(CSBV）结构蛋白的优化表达及其免疫原性比较目的实现中蜂囊状幼虫病毒（CSBV）的vp1、vp2、vp3结构蛋白在大肠杆菌中的高效表达，并对结构蛋白的免疫原性进行比较。方法本研究根据大肠杆菌密码子偏好性利用Optimizer基因序列优化软件对野生型CSBV编

6、码结构蛋白vp1、vp2和vp3(wtvp1、wtvp2和wtvp3）密码子进行优化，人工合成了optivp1、optivp2和optivp3基因片段，利用pGEX-6P-1原核表达系统构建了原核表达质粒pGEX-6p-optivp1、pGEX-6p-optivp2和pGEX-6p-optivp3，分别转化入E.coli菌株Bl21中，经IPTG诱导表达，对重组蛋白利用SDS-PAGE分析和WesternBlotting鉴定正确后，进行表达条件优化，并纯化重组蛋白。利用纯化后的重组蛋白进行小鼠免疫，并定期采血，利用间接ELISA法进行抗体水平检测。三免后14天分

7、离小鼠脾淋巴细胞，利用CCK-8法检测淋巴细胞增值指数，统计学软件分析，比较结构蛋白的免疫原性。结果经过密码子优化的vp1、vp2和vp3基因实现了在大肠杆菌中的高效表达。Western-blotting检测表明重组蛋白能够与兔抗CSBV免疫血清和兔抗gST抗体发生反应；通过小鼠血清效价分析比较以及淋巴细胞增殖检测，中蜂囊状幼虫病毒（CSBV）vp2结构蛋白免疫原性与vp1、vp3相比较显著，而vp3的免疫原性优于vp1。结论通过密码子优化可以实现CSBV结构蛋白vp1、vp2、vp3的高效表达。确定vp2重组蛋白具有较好的免疫原性。本实验为进一步对CSBV致病

8、机制研究、免疫机制和综合