蚌毒灵水煎剂的安全性评价及体外药理作用研究

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1、蚌毒灵水煎剂的安全性评价及体外药理作用研究StudyonsafetyevaluationandpharmacologicaleffectinvitroofToxicmusselwaterdecoction作者姓名：冷春青冷春青领域（方向）：兽医指导教师：韦旭斌教授韦旭斌教授类别：兽医硕士答辩日期：2015年6月5日未经本论文作者的书面授权，依法收存和保管本论文书面版本、电子版本的任何单位和个人，均不得对本论文的全部或部分内容进行任何形式的复制、修改、发行、出租、改变等有碍作者著作权的商业性使用（但纯

2、学术性使用不在此限）。否则，应承担侵权的法律责任。吉林大学硕士学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交学位论文，是本人在指导教师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已注明引用的内容外，本论文不包含其他任何个人或者集体已经发表或者撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已经在文中以明确的方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果均由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日中文摘要蚌毒灵水煎剂的安全性评价及体外药理作用研究《中华人民共和国兽药典》（2010版）收载的蚌毒灵散由黄芩

3、60g、黄柏20g、大青叶10g、大黄10g组成，具有清热解毒之功效，临床上主要用来治疗蚌瘟病。蚌毒灵水煎剂是按照蚌毒灵散处方，经粉碎过筛混匀，采用传统方法制得水煎剂。本课题组前期研究表明蚌毒灵水煎剂具有治疗鸡大肠杆菌病的作用，但其现代毒理学和体外药效学作用目前并不清楚，本研究拟从现代药理学角度对蚌毒灵水煎剂进行毒理学和体外药效学研究，旨在为该中药制剂的临床应用和深入研究提供依据。急性毒性试验通过对小鼠以最大浓度（1g/mL）、最大体积（40mL/kg体重）一次性灌胃给药试验和一天内多次最大量给药试

4、验，考察蚌毒灵水煎剂的急性毒性。结果显示，小鼠的精神状况、饮食情况和运动状态等并没有异常变化，按最大浓度、最大体积给小鼠1次性灌胃，不能引起小鼠死亡；按一天内多次最大量给药，单次给药剂量为40.0g/kg，24h内给药3次，累计最大给药剂量达120g/kg，仍未出现明显的毒性反应，表明该制剂属实际无毒。长期毒性试验通过对3组Wistar大鼠连续4周分别给予高剂量（10g/kg）、中剂量（6g/kg）、低剂量（2g/kg），每日以10mL/kg体重1次性灌胃给药，考察蚌毒灵水煎剂的长期毒性。结果蚌毒灵

5、水煎剂对受试动物的一般健康状况、采食量、饮水量、体重、血液学与血清生化指标、主要内脏器官的组织结构及形态、脏器系数均没有产生不良影响，表明蚌毒灵水煎剂具有良好的临床用药安全性。体外抑菌试验通过采用MH肉汤微量稀释法测定蚌毒灵水煎剂对标准菌株（O78）和临床分离的菌株（1、2、3）的最小抑菌浓度，考察蚌毒灵水煎剂的抑菌作用；通过采用全自动细菌鉴定药敏检测仪进行检测四株大肠杆菌对常用抗菌药物的敏感性和耐受水平。结果显示，最小抑菌浓度分别为：0.5g/mL、0.3g/mL、0.3g/mL、1g/mL，表明

6、蚌毒灵水煎剂对受试菌株有一定的抑制作用；临床分离得到的1、2、3号菌株均为耐药菌株，O78标准菌株仅对四环素耐药；挖Ⅰ孔法和平板点种法测定蚌毒灵水煎剂对耐药性菌株的抑制作用，结果显示：该复方制剂仅对菌株2（耐环丙沙星株）有一定的抑制作用，耐药抑制率为9.09%，对1、3号菌株没有明显的耐药性抑制作用。抗炎作用试验首先采用MTT法测定蚌毒灵水煎剂的安全浓度范围，然后用不同浓度的蚌毒灵水煎剂对RAW264.7细胞株干预1h，加入脂多糖刺激共同孵育12h后，收集细胞培养上清液，应用ELISA试剂盒测定细胞

7、上清中的TNF-α、IL-6、IL-10的分泌量，考察蚌毒灵水煎剂对炎症反应的抑制作用。结果显示，通过MTT试验证明了蚌毒灵水煎剂在0.5-2mg/mL浓度范围内对RAW-264.7细胞不具有细胞毒性作用；通过ELISA方法测定1mg/mL浓度的蚌毒灵水煎剂能显著的抑制TNF-α的分泌，2mg/mL浓度的蚌毒灵水煎剂能极显著的抑制TNF-α的分泌（p＜0.01）；0.5mg/mL浓度的蚌毒灵水煎剂能够显著降低IL-6分泌，1和2mg/ml浓度的蚌毒灵水煎剂能够极显著抑制IL-6的分泌（p＜0.01）

8、；0.5mg/mL浓度的蚌毒灵水煎剂能显著的增加IL-10的分泌，1和2mg/mL浓度的蚌毒灵水煎剂能极显著升高IL-10的分泌水平（p＜0.01）。蚌毒灵水煎剂不仅可以显著降低炎症细胞模型中促炎因子TNF-α和IL-6的分泌量，还可以显著增加抗炎因子IL-10的分泌量，表明了蚌毒灵水煎剂具有很好的抗炎作用。综上所述，蚌毒灵水煎剂对小鼠均无急性、长期毒性反应，未测出LD50值，具有良好的用药安全性。蚌毒灵水煎剂具有抗炎作用，同时对鸡大肠杆菌具有一定的抑菌和耐药性抑制作