多孔聚外消旋丙交酯医用膜防止周围神经粘连的实验研究

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1、中文摘要多孔聚外消旋丙交酯医用膜防止周围神经粘连的实验研究研究背景及目的：随着周围神经损伤患者数量不断增多，因神经功能恢复不理想而造成诸如肌肉萎缩、运动感觉功能部分或全部丧失等并发症给患者带来了严重的身体和精神创伤。因此，周围神经损伤后神经纤维的再生和功能恢复是周围神经修复的关键，也是医学界难以解决的难点问题。由于神经周围瘢痕形成及局部神经粘连是影响神经再生及功能恢复的重要因素之一，因此如何解决神经修复过程中周围组织的粘连问题是当前的研究热点。目前，临床主要采取以下措施防止神经粘连：局部注射药物、自体或异体生物导管（膜）、应用非吸收材料作为神经周围的物理屏障，采用可

2、吸收材料处理神经吻合口等。局部注射药物主要是指在神经吻合口部位应用地塞米松、强的松龙、玻璃酸钠、几丁糖等。局部用药能解决部分粘连的问题，但药物代谢吸收快，易流动、术后容易排出，治疗效果欠理想。静脉作为神经损伤后的修复措施虽可建立有利于神经再生的微环境，但自体来源的静脉需要附加手术，取材的部位和范围受到限制。可降解的医用高分子材料壳聚糖、纤维素等属于天然材料，其制成的神经导管（膜）目前被认为是理想的防止神经粘连的生物材料。然而因具有致敏性及免疫排斥反应，降解时间与神经再生时间不同步，材料脆性强，通透性差，影响组织液和营养液的交换，且组织相容性欠佳，临床应用受到限制。由

3、中科院长春应化所、长春圣博玛生物材料有限公司联合开发的聚-DL-乳酸可吸收医用膜（以下简称PDLLA医用膜）以生物可降解的聚乳酸类聚合物为材料，利用相转化法制备新型的具有多孔结构的可吸收医用防粘连膜。根据推测：多孔结构与无孔膜产品相比，在保持良好的力学性能基础上，具有非常好的柔韧性和降解时间可控性；多孔结构的存在可能会使产品既具有好的阻隔效果，起到防止神经粘连的作用；同时又可以实现膜两侧的组织液流通顺畅，有利于营养物质的交换，促进神经再生。该产品已经完成初步理化指标的测定，本实验拟通过体外生物学及动物实验研究进一步明确其在体内、外的生物相容性及防止神经粘连、促进神经

4、再生的作用，为该产品的批量制备和临床应用做前期准备工作。I实验方法及结果：本实验通过（1）体外的家兔皮肤刺激试验、细胞毒性试验及骨髓嗜多染红细胞微核试验检测PDLLA医用膜的皮肤刺激性、细胞毒性和遗传毒性。（2）通过将PDLLA医用膜植入大鼠体内模拟手术，检测该材料在体内的代谢毒性、对血液系统的影响，肝肾功能损害及对重要脏器的影响。（3）通过对PDLLA医用膜防止大鼠坐骨神经粘连的实验研究，检测该材料的降解性及防止神经粘连、促进神经再生的作用。体外试验中，进行了家兔皮肤刺激实验、细胞毒性实验及骨髓嗜多染红细胞微核实验。在皮肤刺激实验中，6只家兔分为3组进行测试；采用

5、生理盐水做为阴性对照，2,4-二硝基氟苯做为阳性对照，PDLLA浸提液为试验组；对家兔皮肤进行24h贴敷，观察；记录1h、24h、48h、72h各接触部位的皮肤刺激反应情况。结果表明家兔对实验材料PDLLA浸提液的皮肤反应分级为“无”，说明PDLLA医用膜对家兔皮肤无刺激性。在细胞毒性实验中我们采用了MTT法进行检测，采用非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)做为受试细胞；设置阴性对照组（RPMI-1640培养液）、阳性对照组（0.5%苯酚溶液）、试验组为12.5%、25%、50%、100%浓度的PDLLA浸提液；在24h、48h、72h时测得各组OD值及Vero细胞相对增

6、值率，其中72hPDLLA组OD值：0.880±0.034~0.895±0.040（x±S）,细胞增殖率为99.9％~101.6％，而阴性组为OD值：0.881±0.039（x±S），增殖率为100.0％二者无显著性差异（P>0.05）。即PDLLA医用膜对细胞没有毒性，符合生物材料的无毒性要求。在微核试验中将50只小鼠随机分为5组，分别为PDLLA浸提液低剂量组（50ml/kg）、中剂量组（100ml/kg）、高剂量组（200ml/kg）、阳性对照组（环磷酰胺40mg/kg）以及阴性对照组（生理盐水1.5ml）；采用2次给药法腹腔注射，即第1次给药24h后进行第2

7、次给药，第2次给药后6小时后处死动物。阳性组的微核率高达（49.7±4.03）‰（x±S），而生理盐水组为（1.85±0.11）‰（x±S），PDLLA组为（1.98±0.08~2.27±0.19）‰（x±S），PDLLA与生理盐水组比较微核率无显著性差异（P>0.05），说明PDLLA医用膜无小鼠遗传毒性。在体内慢毒性实验中，模拟手术过程将试验材料市售生物膜（天义福人工神经鞘管）及PDLLA医用膜植入大鼠坐骨神经与肌肉之间，分别在1W、4W、12W进行血细胞检测、血清生化学检测和重要的脏器的病理学检查来评估PDLLA医用膜植入动物体内的毒性。试验结果显示生物膜