梨woxt1 mrna韧皮部远距离传递机理研究

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1、分类号：单位代码：密级：学号：博士学位论文梨韧皮部远距离传递机理研究研究生段续伟指导教师李天忠教授申请学位门类级别农学博士专业名果树学研究方果树分子生物学所在学农学与生物技术学院ChinaAgriculturalUniversityDoctorThesisResearchontheMechanismofWoxTlmRNALong-distanceTransportinPearPhloemDoctorCandidate:DuanXu-WeiSupervisor:ProfessorLiTian-ZhongMajor:Po

2、mologyResearchField:PomologyandMolecularBiologyCollegeofAgronomyandBiotechnologyChinaAgriculturalUniversityMay,2015独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研宄工作及取得的研宄成果。尽我所知，除了文中已经注明引用和致谢的内容外，论文中不包含本人和其他人己经发表或撰写过的研宄成果，也不包含为获得中国农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献

3、均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名时间：年厂月关于学位论文使用授权的说明本人完全了解中国农业大学有关保留、使用学位论文的规定。本人同意中国农业大学有权保存及向国家有关部门和机构送交论文的纸质版和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人同意中国农业大学将本学位论文的全部或部分内容授权汇编录入《中国博士学位论文全文数据库》或《中国优秀硕士学位论文全文数据库》进行出版，并享受相关权益。細的学位论文在解密后雌守此协议）学位论文作者签名时间：加年月巧日导师签名：时间摘要果树嫁接无性繁殖时，砧木会对接穗的树形、抗

4、性、果实品质等产生影响。这种影响除了与生理结构、激素和营养运输等有关外，还与等大分子物质远距离传递有关。目前有关韧皮部远距离传递机理在草本植物上取得了一定的进展，但是对于多年生木本植物的果树来说，研宄进展缓慢。本研宄以杜梨为试验材料，通过环剥、嫁接等园艺措施结合现代生物学技术手段克隆鉴定获得一个具有韧皮部远距离传递功能的并且能够对植株形态产生影响；体外互作、共转基因后嫁接实验等证明该基因与多聚嘧啶结合（蛋白结合在韧皮部远距离传递。其主要研宄结果如下：、结合基因组，从杜梨中克隆获得个基因；和结构分析发现均具有典型的结构

5、域，其中具有个未知的区，与其他成员结构不同。分析显示，在根、茎尖、叶片和韧皮部中轻微表达；聚类分析发现与拟南芥基因聚在一起，但结构与结构略有不同，加之，后续研究证明具有远距离传递能力，故将命名为。、神网议基因全长，分子量约为年生杜梨莲原位杂交结果显示，在韧皮部筛管伴胞中表达较强；载体基因枪轰击洋葱表皮及转化玉米原生质体瞬时表达结果显示主要定位在细胞核中，并在细胞膜上呈不规则点状聚集。超表达能够使烟草形态发生变化：叶片上表皮绒毛增多，个别叶片变为勺子状；茎部发生扭曲，呈不规则形；主根消失，侧根生长旺盛。但这些症状会随着

6、植株生长逐渐消失。、对杜梨侧枝进行两道环剥后利用对靭皮部中检测发现信号会由于軔皮部集流的阻断而消失，初步推测軔皮部中的网《可能由其他部位运输而来；在对年生杜梨实生苗进行不同环剥处理发现，押网《主要在侧枝、主干顶部以及根部合成后随着韧皮部集流进行远距离运输，在韧皮部中不合成利用分析‘鸭梨’微嫁接杜梨体系以及年生的‘鸭梨’杜梨植株进行鉴定发现，在鸭梨’杜梨内，能够通过韧皮部进行双向传递。、为了进一步确定具有远距离传递性，选用启动子驱动全长融合进行烟草转基因，野生型烟草与转基因烟草不同组合嫁接后对野生型接穗或砧木进行检测确

7、定『具有双向传递的能力；并且转基因植株为砧木能够使得野生型接穗花柱变长。、根据结构域将其删减成不同片段来确定主要传递区域，在伴胞特异启动子驱动下进行烟草转基因，以野生型植株为接穗转基因植株为砧木进行嫁接检测接穗中片段的传递信号，统计发现：包含区域的片段均具有传递性，低于、勝麗不传递。分析删减片段发现，多聚嘧啶结构区为传递片段特有区域。6、多聚嘧啶结合（蛋白能够与上结构区特定结合。根据基因组分析在杜梨中克隆得到个蛋白，聚类分析发现与同源性较近，且具有个区且定位于细胞核和细胞质中，与和有所不同。实验发现，蛋白能够与可远距

8、离传递的、『都能结合，而蛋白和只能与其中一个传递结合。因此，我们对在韧皮部远距离传递中的作用进行进一步研究。、免疫定位分析发现在杜梨茎部伴胞中表达强烈。利用伴胞特异启动子驱动融合进行烟草转基因，与野生型接穗嫁接后，鉴定发现在野生型接穗中能检测到融合蛋白。说明伴胞中产生的蛋白通过嫁接口进行了传递；选育和单转和双转基因烟草植株，进行不同组合嫁接，鉴