柳蚕丝心蛋白重链n端结构域的结构与功能研究

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1、夺固钟違满某大赛ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＳｃｉｅ打ｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙｏｆＧｈｉ打ａ硕±学位论文Ｘ－戀只，：：＞论文题巨柳養送蚕合重妓Ｎ端结构域的结掏与巧能研堯冉明吼作者姓名生物化学与分子逢物学学科专业屬照教援務李星教投－导师姓名二〇－五年十月完劇间’、？中逸种緣我术夫緣硕±学位论文＠）柳蚕丝心蛋白重链Ｎ端结构域的结构与功能研究作者姓名：冉明凤学科专业；生物化学与分子生物学导师姓名：周丛照教授陈宇星教授—完成时间；

2、二〇五年十月八日ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｏｆＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙｏｆＣｈｉｎａｙ，Ａｄｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎｆｏｒｍａｓｔｅｒｓｄｅｇｒｅｅ戀Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｎｓｉｇｈｔｓｂｒｏ－ｉｎｔｏｔｈｅ巧ｉｎＮｔｅｒｍｉｎａｌｄｏｍａｉｎｏｆＡｃｔｉａｓｓｅｌｅｎｅ’乂ｕ化ｏｒｓＮａｍｅ；ＭｉｎｇｆｅｎｇＲａｎＳｅｃｉａｌｉｔ：Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒ＆ＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｐｙｙｇｙｉ－ｉＣｈｅｎＳｕｐｅｒｖｓ

3、ｏｒ：Ｐｒｏｆ．ＣｏｎｇＺｈａｏＺｈｏｕ＆Ｐｒｏｆ．Ｙｕｘｎｇ化Ｆｉｎｉｓｈｅｄｔｉｍｅ：Ｏｃｔｏｂｅｒ８，２０１５？？中国科学技术大学学位论文原创性声明本人声明所呈交的学位论文，是本人在导师指导下进行研究工作所取得的成果。除已特别加Ｗ标注和致谢的地方外，论文中不包含任何他人已经发表或撰写过的研巧成果一。与我同工作的同志对本研究所做的贡献均己在论文中作了明确的说明。．作者签名：棘＼换签字日期：如１玉Ｍｙ中国科学技术大学学位论文授权使用声明一作为申请学位的条件之，学位论文著作权拥有者授权中

4、国科学技术大学拥：有学位论文的部分使用权，即学校有权按有关规定向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，，允许论文被查阅和借阅可Ｗ将学位论文编入《中国学位论文圣文数据库》等有关数据库进行检索，可Ｗ采用影印、缩印或扫捕等复制一手段保存、汇编学位论文。本人提交的电子文释的内容和纸质论文的内容相致。保密的学位论文在解密后也遵守此规定。近公开□保密（年）．—ｊｎ＾作者签名：Ａ的凤导师签名：签字日期：签字日期：＾摘要一蚕丝是自然界最引人瞩目的生物材料之，分为家蚕丝和野蚕丝两大类。家蚕丝广泛

5、应用于纺织品和手术缝合线。近些年来，野蚕丝在生物材料方面的应用已成为一个新趋势。蚕丝蛋白制备的不同材料具有生物相容性、可控降解性和突出的机械性能Ｈ大恃点，被广泛应用于药物输送、狙织工程支架、体外疾病模型、、填埋剂等，。蚕丝是Ｗ丝屯蛋白为中也包被多层丝胶蛋白的复合纤维。重链（Ｆｉｂｒｏｉｎｈｅａｖｙｃｈａｉｎ，ＦｉｂＨ含有重复晶形区Ｗ及非重复的Ｎ末端区和Ｃ末端区。）Ｆ、ｉｂＨ作为丝也蛋白的核屯蛋白，构成了蚕丝的骨架，决定着蚕丝的主要理化性质，因此从分子层面上研究它的组装机理和调控机制是非常具有价值的。家蚕的丝屯、

6、２６ｋ蛋白由重链３９０ｋＤａ）、轻链（Ｄａ和糖蛋白Ｐ２５（３０ｋＤａ［＾６：６：１比例形（））成大的复合物，，而研究表明，大蚕蛾科下的野蚕丝必蚕白不含有轻链和糖蛋白却是重链Ｗ共价键相连的二聚体复合物形式存在。我们课题组解析了家蚕重链Ｎ末端结构域田ｍＦ化ＮＴ的晶体学结构，ＢｍＦｉｂＮＴＷ同源二聚体结构存化由两个）－－单体交叉形成８股反平行的ｐｓｈｅｅｔｓ，每个单体含有四股ｐｓｈｅｅｔ，两两成对形成－ｈａＮＮＰｉｉｐｉｎｓ结构。然而柳蚕丝的装配过程中重链末端结构域（Ａｓ巧ｂＨ发挥着怎），正是本文力求攻克的难题样不同

7、的功能。ｉｉＳ－－本研究中，我们通过分子筛、ＤＳＭＧＥ、ＤＬＳ、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ、ＮＭＲＨＨ（、ＡＮＯＳＥＹ等手段鉴定得知柳蚕丝屯蛋白重链Ｎ端结构域ｓＦ化ＨＮ在溶液中始终）（）Ｗ单聚体形式存在，而ＢｍＦｉｂＨＮ却是Ｗ稳定二聚体形式存在，二聚体间存在的强疏水相互作用难ｉｉ＞ＳＤＳ、！被尿素和高温破坏掉。通过圆二色谱和核磁滴定实验鉴定ＡｓＦ化ＨＮ二级结构的含量随着ｐＨ值和己醇浓度的变化发生了改变。最后ｉ＂ＡｓＦ化ＨＮ－－利用核磁学手段对１９１０ＨＮＨＳＣ、ＣＢＣＡＮＨ、（巧蛋白采集了ＱＣＢＣＡＮＨ－ＣＯ、ＨＮＣ

8、Ｏ、ＨＮＣＡＣＯ、ＨＢＨＡＣＢＣＡＣＯＮＨ、ＨＣＣＯＮＨＴＯＣＳＹ、（）（）（）（）Ｋ＾－ＨＮＨ－ＴＯＣＳＹＮＯＥ－－－ＣＣＣＯ、ｎＳＹ、ＣＮ