基于环介导等温扩增技术快速诊断大豆根部主要病害的研究

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1、纖分类号聋学号為请泉違乂毒博壬学位论文基于环介导等温扩增技术快速诊断大豆根部主要病害的研究陆辰足指导教师王源超教授郑小波教授专业名称植物病理学研究方向真茵遗传与分子生物学答辩日期二〇—五年六月＇■？；ＲＡＰＩＤＤＩＡＧＮＯＳＩＳＯＦＳＯＹＢＥＡＮＲＯＯＴＤＩＳＥＡＳＥＳＢ乂ＳＥＤＯＮＬＯＯＰ－ＭＥＤＩＡＴＥＤＩＳＯＴＨＥＲＡＬＡＭＰＬＩＣＡＴＩＯＮ（ＬＡＭＰ）ＢｙＬＵＣｈｅｎ－ｃｈｅｎ乂ＤＩＳＳＥＲＴＡＴＩＯ

2、ＮＳｕｂｍｉｔｔｅｄｔｏＮａｎｉｎｇＡｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｊｇｙＩｎＰａｒｔｉａｌＦｕｌｆｉｌｌｍｅｎｔｏｆ化ｅＲｅｕｉｒｅｍｅｎｔｓｑ化ｒｔｈｅＤｏｃ化ｒａｌＤｅｇｒｅｅｏｆＰｈｉｌｏｓｏｐｈｙＳｕｅｒｖｉｓｅｄｂｐｙＰｒｏｆｅｓｓｏｒＷＡＮＧＹｕａｎｃｈａｏＰｒｏｆｅｓｓｏｒＺＨＥＮＧＸｉａｏｂｏＣｏ化ｇｅｏｆＰｌａｎｔＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎ，ＮａｎｊｉｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｉｎ２

3、１００９５Ｐ？化ＣＨＩＮＡｊｇ，Ｊｕｎｅ２０１５？，原剑性声明本人郑重声明，：所呈交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中己经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中Ｗ明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者（需亲笔）签名（Ｓ：年月《日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国

4、家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南京农业大学可Ｗ将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可Ｗ采用影印、缩印或扫措等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密口。年＂＂（请在Ｗ上方框内打Ｖ）＇＂学位论文作者（需亲笔）签名：东焉＞日／１年６月＾Ｉ导师￣（需亲笔）签名；｜年＾月日冰衣］《目录目录巧要ＩＡＢＳＴＲＡＣＴＶ引胃ＩＸ上篇文献综述一第章由病原菌引起的大豆根部

5、病害研究进展１１大豆根腐病１１．１大豆银抱根腐病２１．２大豆疫霉根腐病６１．３大豆立巧病８１．４大豆炭腐病９２大豆红冠腐病１１参考文献１４第二章大豆根部病害诊断技术研究进展２１１２１传统的检测方法１．１大豆根部病原菌分离２２１２２１丄病原真菌分离１．１．２２２大豆疫霉分离１．１２３．３立枯丝核菌分离１丄４冬巧丽赤壳菌分离２３１．２病原菌属的鉴定２４２免疫学法２４３分子技术２５３１Ｄ．ＮＡ探

6、针技术２５３ＤＮＡ５．２随机扩增多态性技术２３．３限制性片段长度多态性％３．４扩增片段长度多态性２６３５７．聚合酶链式反应技术２３．６实时焚光定量ＰＣ民技术２８ｉ基于环介导等温扩増技术快速诊断大豆根部主要病害的研究３／７环介导等温扩增技术２９参考文献３１下篇研究巧容一章环介导等温扩増技术诊断由５种常见巧抱苗引起的大豆慷巧根腐病第３７一＞第节ＷＣＴｉ５／Ｃ为鞭标基因建立检测尖嫌抱苗、木贼嫌抱菌和禾谷镶抱菌的ＬＡＭＰ技术体系巧１材料与方法

7、４０１．１供试菌株４０１４０．２菌株培养及菌丝粉制备１、４０．３实验所需试剂仪器与耗材１．４基因组ＤＮＡ的提取４２１４２．４．１菌丝基因组ＤＮＡ提取１．４．２人工接种发病植物组织ＤＮＡ提取４２１．５ＬＡＭＰ引物设计与合成４２１．６ＬＡＭＰ反应体系４４Ｌ７ＬＡＭＰ扩增产物判断方法４５２．结果与分析４５２．１ＬＡＭＰ检测体系的特异性验证４５－２丄－１ＣＩＴ５／ＣＦＯＬＡＭＰ体系特异性验证４５－－２丄２ＣＩＴＪ／ＣＦｅＬＡＭＰ

8、体系特异性验证４７－／Ｃ－ＦＬＡＭＰ２丄３ＣＩＴＪｇ体系特异性验证４８２．２３个ＬＡＭＰ检测体系的灵敏度验证５０２５１．３３个ＬＡＭＰ技术检测人工接种发病的大豆病组织中的病原菌２巧．４３个ＬＡＭＰ技术检测田间发病的大豆病组织中的病原苗第二节ＷｒＥｉＷａ为郎标基因建立检测茄腐银抱茵、层出镶抱菌ＬＡＭＰ检