基于功能化介孔二氧化硅载体的漆酶固定化研究

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1、：１０４２６：学校代码分类号．２０１２１００２０２．．密级学号著息幸Ｍ支乂等ｉｈｎｏｌｏＱｉｎｇｄａｏＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＳｃｅｎｃｅ＆Ｔｅｃｇｙ硕±学位论文ＭＡＳＴＥＲＤＥＧＲＥＥＴＨＥＳ‘ＩＳ某于功能化介孔二氨化桂裁体的漆酶固定化研究？Ｊ、：付安然作者指导教师：杨波学科专业：环境工程专业代码：０８３００２研巧方向：氷污染控制技术２０１５年６月１０日基于功能化介孔二氧化桂载体的漆酶固

2、定化研究学位论文完成日期：２０１５年４月２７号指导教师签字；反—－答辩委员会成员签字：冷《衣疋轰緣統＼ＩｈＸ青岛科技大学研巧生学位论文基于功能化介孔二氧化枉载体的漆酶固定化研究摘要酶在许多领域己得到应用，但游离酶容易受环境影响失去活性，而固定化酶比较稳定，对抑制剂敏感性化，可ｔｉｌ重复使用。本研究通过实验制备介孔二氧化珪载体，并对其进行表面修饰得到官能化介孔二氧化珪载体，并上述载体对漆酶进行固定化。研巧不同的官能团（氨基和己蹄基）和不同

3、固定化方法（交联吸附法和吸附法）对漆酶固定化的影响。通过考察漆酶的固定量来讨论不同官能团对漆酶固定化的影响；通过测试固定化漆酶的酶活及其酶活回收率，探讨不同方法对固定漆酶的影响。最后研究固定化漆酶的性质，并与游离漆酶的性质进行对比分析。（，１）游离白腐真菌漆酶活性测试条件优化。实验结果表明测定酶活的最’适合条件为：波长６００ｎｍ、Ｈ４０、反应温度３０Ｃ、Ｏ．ｌｍｏｌ／Ｌ。ｐ值．缓冲溶液的浓度－＝ｍ－ｌｎ．．动力学曲线；反应５ｉ内，反应符合线性方程ｙ０００９７ｘ０００１６随时

4、间增加，；６反应速率增加趋势减小，１ｍｉｎ反应终止。－（２）官能团对漆酶吸附法固定化影响研充。研究发现，ＳＢＡ１５的载酶量是－－３００２ｍ－－／，ＳＢＡ１５ＮＨ７６．８ｍ／，ＳＢＡ１５ＣＨＣＨ的载酶量是５１．６．ｇｇ２的载酶量是１ｇｇ２ｍｇ／ｇ。由此可见，官能团的引入降低了吸附法固定化炼酶的载酶量，尤其是乙蹄基影响显著。（３）吸附法和交联吸附法漆酶固定化的影响因素研巧。在吸附法固定漆酶（５ｈ、０５ｍｍＬ、最Ｈ５的；ｔｅ优条件下固定时间最适合漆酶浓度．：ｇ／适合反

5、应ｐ）固定漆酶的酶活是３００５Ｕ／ｇ，酶活力回收率为６０．１％；在交联吸附固定漆酶的最优（交联时间７ｈ、固定化时间７ｈ、酶浓度．ｍ／ｍＬ、戊二醒浓度６％）固条件下１５ｇ定化漆酶的酶活是％１５Ｕ／ｇ，酶活力回收率是７２．３％。由此可见，交联吸附法化于吸附法。－－（４）固定化漆酶（ＳＢＡ１５ＮＨ２为载体）与游离漆酶的性质对比分析。固定‘Ｃ‘Ｃ化漆酶最适温度是５０，游离漆酶最适温度是３０；固定化练酶最适ｐＨ为４．５，游离漆酶最适ｐＨ为４；储存２０天后酶活力：吸附法固定漆酶活力

6、为初始６９％；交联吸附法活力为初始的７９％；而游离酶活性是原来的２９％。吸附法固定化酶的Ｋｍ值为０．１６ｍｍｏｌ／Ｌ，交联吸附法固定漆酶的Ｋｍ值为〇別ｍｍｏｌ／Ｌ，游离酶的Ｉ基于功能化介孔二氧化巧载体的漆酶固定化的研究Ｋｍ０８８Ｈ值为．０ｍｍｏｌ／Ｌ。因此适温度提高，最适，固定化漆酶最ｐ略有增大，存储稳定性增强，酶活性有所减小。关键词：漆酶固定化介孔二氧化珪氨基乙赌基？９ＩＩ青岛科技大学研究生学位论文ＴＨＥＰＲＥＰＡＲＡＴＩＯＮＯＦＭＥ

7、ＳＯＰＯＲＯＵＳＳＩＬＩＣＡＡＮＤＴＨＥＩＭＭＯＢＩＬＩＺＥＤＬＡＣＣＡＳＥＡＢＳＴＲＡＣＴＥｎｚｙｍｅｉｓｗｉｄｅｌｕｓｅｄｉｎｄｉｆｅｒｅｎｔ巧ｅｌｄｓ．ＢｕｔｆｒｅｅｅｎｚｅｉｓｅａｓｉｌａｆｅｃｔｅｄｂｙｙｍｙｙｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｎｄｌｏｓｅｓｉｔｓａｃｔｉｖｉｔＷｈｉｌｅ化ｅｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄｅｎｚｅｉｓｓｔａｂｌｅｌｏｗｙ；ｙｍ，ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｔｏｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓａｎｄｃａｎｂｅｒｅ

8、ｕｓｅｄ．ｙ＊Ｔｈｅｐｉｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆｍｅｓｏｐｏｒｏｕｓｓｉｌｉｃａｃａｒｒｉｅｒａ打ｄｔｈｅｓｕｒｆａｃｅｍｏｄｉ打ｃａｔｉｏｎｏｆｏｒｏｕｓｓｉｌｄｏｂｉｌｔｌａｗｒｅｉｎｔｈｔ．Ｔｍｅｓｏｐｉｃａｃａｒｒｉｅｒａｎｉｍｍｉｚａｉｏ打ｏｆｃｃａｓｅｅｓｔｕｄｉｅｄｉｓｓｕｄｙｈｅｔｉｌｌｆｅｅ打ｔｉｍｍｏｂｉｔｉｏｉ打ｆｌｕｅｎｃｅｏｆｆｕ打ｃｉｏ打ａｌｒｏｕｓｎｃｕｄｉｎａｍｉｎｏａｎｄｖｉ打ａｎｄ