口岸截获天牛科昆虫dna条形码试剂盒的研究

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1、分类号S763.35a兔:各学位代码309密级GK每盡爹学校代码10298学号3120462态京林戒大学

2、研究生硕士学位论文

3、^&S5Nfi5»s£S«s4S=5si5^5?：tf=NS3S8>Si«sas«>®!»sa^'>«S^4S!!t«'*i«>t«>Jy*'"*S»^aS5^«jasSs«Nr«SS?»S33f>Js«'>&5SN!S»'i5S8>«5»N!fcS5sii«x4«ses«v5tf^sS2SSSisRsSSSN^论文题目：口岸截获天牛科昆虫DNA条形码试剂盒的研究作者：陈梦义专业：森林保护学研究方向：昆虫学指

4、导教师：郝德君教授二〇一五年六月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下进行的研究工作所取得的成果。尽我所知，除文中已经特别注明引用的内容和致谢的地方外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式注明并表示感谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者（本人签名）：义^斤年<月/g日学位论文出版授权书本人及导师完全同意《中国博士学位论文全文数据库出版章程》、《中国优秀碩士学位论文全文数I居库出版章程》（以下简称“章程”，见w

5、ww_cnki.net),愿意将本人的学位论文提交“中国学术期刊（光盘版）电子杂志社”在《中国博士学位论文全文数据库》、《中国优秀硕士学位论文全文数据库》中全文发表和以电子、网络形式公开出版，并同意编入CNKI《中国知识资源总库》，在《中国博硕士学位论文评价数据库》中使用和在互联网上传播，同意按“章程”规定享受相关权益。论文密级：gfe开□保密（_年_月至_年_月）（保密的#佐讼式在解密后裘遂守此你试)作者签名：I料义导师签名：年Z月/名日XC年月致谢本文是在郝德君教授和安榆林研究员的精心指导和大力支持下完成的，他们渊博的知识开阔的视野给了

6、我深深的启迪，论文凝聚着他们的血汗，他们以严谨的治学态度和敬业精神深深的感染了我对我的工作学习产生了深渊的影响，在此我向他们表示衷心的谢意。这两年来感谢江苏出入境检验检疫局动植食中心安榆林研究员，安主任平易近人，对我们每个实习生都微笑面对，生活和工作中面面俱到，您绝对是动植食中心每个人心中的好领导、好老师！徐梅老师和钱路老师对我专业思维及专业技能的培养，他们在学业上的心细指导为我工作和学习打下了良好的基础，在这里我要向诸位老师深深的鞠上一躬。特别要感谢的是我的导师郝德君教授，让我有机会走进南京林业大学，在这三年来，郝老师悉心周到，事事从学生

7、角度考虑，为我们着想，每次和您的谈话，总有家人的感觉。对郝老师的感激之情我无法用语言来表达，在此向郝老师致以最崇高的敬意和最真诚的谢意！感谢这三年来我的亲人和朋友，生活和工作的支持和关心。感谢我的母亲养育，姐姐的照顾，女朋友的相伴，感谢实验室的王满满、凌梦沁、陈瑞旭，室友张也，马上就要各奔前程了，希望你们有好的前途。最后感谢评阅论文和出席答辩委员会的诸位专家、教授在百忙之中给予批评指正。作者：陈梦义二〇一五年六月摘要天牛科昆虫是林木蛀干害虫中的一个重要类群，既可为害活体树木，又可为害林木产品，还可以通过商品贸易进行远距离传播。有的种类还是林

8、木病原菌的传播媒介，造成严重的危害和经济损失。随着我国对外贸易的发展，国外林木害虫特别是天牛科害虫屡屡在口岸被截获，表明外来的天牛种类对我国森林生态环境的威胁正在不断加剧。有害生物种类的准确鉴定是检验检疫工作中的重要一环。目前植物检疫性昆虫鉴定以形态学方法为主，但传统的形态鉴定存在一定的局限性，如昆虫的早期形态与残缺虫体难以辨认、鉴定结果受主观影响大、鉴定周期较长等原因，在一定程度上影响了检疫工作的准确性和疫情检出率。DNA条形码（DNABarcoding）是近年来生物分类鉴定的研究热点，该技术的发展弥补了传统形态分类中的不足，为有害生物的

9、分子鉴定提供了新的技术手段，已被广泛应用于发现和描述新种或隐存种、物种分子鉴定、系统发育等研究。本项研究基于线粒体COI基因（线粒体细胞色素氧化酶亚基I），对墨天牛属、虎天牛族、断眼天牛属、白条天牛属等所属种类进行了种群内特征鉴定，初步取得了族、属内不同种类的特征基因，使种得以区分。主要研究结果如下：1.采用改进的加拿大条码试剂中心CCDB开发的动植物DNA提取方法提取天牛科昆虫线粒体COI基因。该提取方法不但能保存珍贵标本的完整性，而且成本低廉，但相较市售的DNA提取试剂盒则提取时间较长。2.基于DNA条码技术的发展，提出了昆虫DNA条码

10、试剂盒（DNAbarcodingidentificationkittechnology）的概念。根据线粒体核糖核苷酸碱基位点区分近缘种，样本在经过简单的PCR扩增测序之后即可获得