宫内生长迟缓大鼠胰岛DNA甲基化的研究

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1、分类号：R725.8单位代码：10159密级：公开学号：201010227博士学位论文中文题目：宫内生长迟缓大鼠胰岛DNA甲基化的研究英文题目：DNAmethylationinthedevelopmentofpancreaticisletsinratswithintrauterinegrowthrestriction论文作者：张丹指导教师：辛颖教授学科专业：儿科学完成时间：2018年11月中国医科大学博士学位论文宫内生长迟缓大鼠胰岛DNA甲基化的研究DNAmethylationinthedevelopmentofpancreaticisletsinratswithintrau

2、terinegrowthrestriction论文作者张丹指导教师辛颖教授申请学位医学博士培养单位第二临床学院一级学科临床医学二级学科儿科学研究方向小儿内分泌系统疾病论文起止时间2013年1月—2018年11月论文完成时间2018年11月中国医科大学（辽宁）2018年11月—＿卿１本人郑重声明：本论文是我个人在导师指导下独立进行的研宄工作爻取得的研宂成果，不包含其他人或机构，论文中除加以标注的内容外己经发表或撰写过的研宄成果，也不包含本人为获得其他学位而使用过的成果？对本研宄提供贡献的其他个人和集体均己在文中进行了明确的？说明并表示谢意。本人完全意识

3、到本声明的法律结果由本人承担论文作者签名：／０曰曰期：年／月《中国医科大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定？问５学校保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的原件、夂印件Ｗ电ｆ版，允许学位论文被査阅和借阅。本人授权中国Ｋ科人学可以将本学位论文的全部或部分内容编入宥关数据庳进行检索？可以采用影印、缩１印或扫描等复制手段保存和汇编学位论文？。（保密：谘在括号内保密（），在年后解密适用本授权书＿“厂划〉论文作者签名：：指导教师签名ｊＭ／日日期：；＊／年／丨月曰日期：冬年丨月＞？ｉ中

4、国医科大学博士学位论文摘要研究目的：宫内生长迟缓（IntrauterineGrowthRestriction，IUGR），表现为胎儿未能达到其遗传因素影响下的应有大小，是胚胎发育异常最常见的形式。动物实验研究和流行病学调查都认为IUGR会增加成年期发生肥胖、冠心病、2型糖尿病和糖耐量异常等代谢综合征（MetabolicSyndrome，MS）的风险。然而迄今为止，IUGR引起代谢综合征的机制尚未阐明。近年来，表观遗传学的迅猛发展，各项试验手段的不断进步，为人们从表观遗传学角度探索IUGR引起成年期代谢综合征的机制提供了可能。DNA甲基化是表观遗传调控的重要方式之一,主要发生在

5、CpG岛，能够对营养、发育、环境等不同的信号做出反应,参与完成细胞的时序调控和适应调控。DNA甲基化芯片技术和检测单个基因DNA甲基化的各种方法，为从整体基因组DNA甲基化和易感基因的DNA甲基化进行研究提供了技术平台。研究显示，IUGR新生儿表现为低血糖和低胰岛素血症，胰腺β细胞发育不良，功能障碍。胰腺β细胞的发育是一个由多因素共同参与的复杂过程，DNA甲基化是体内极为重要的基因内源修饰作用。本研究通过孕期全程低蛋白饮食法建立IUGR大鼠动物模型，观察IUGR大鼠不同时间点各项指标的变化规律，通过DNA甲基化芯片检测正常和IUGR新生鼠胰岛全基因组的DNA甲基化状态，筛选出

6、差异性DNA甲基化位点，结合生物信息学分析结果最终确定候选位点。采用单个基因甲基化位点检测方法检测候选差异性DNA甲基化位点，并且检测其相对应基因mRNA水平的表达情况。本研究通过研究DNA甲基化在IUGR大鼠胰岛生长发育过程中的变化规律，旨在揭示DNA甲基化与IUGR的内在联系，为IUGR引发代谢综合征的机制研究提供新的线索。研究方法：运用孕期全程低蛋白饮食法建立IUGR大鼠动物模型，确认已受孕的SPF级健康Wistar雌鼠（体重230~280g）48只（中国医科大学附属盛京医院实验动物中心提供）。按照喂养饲料（中国医学科学院实验动物研究所提供）不同随机分成两组：标准饲料饮

7、食组（n=24），蛋白含量23%，喂养至分娩得到正常子鼠，此为正常对照组（CON组）；孕期全程低蛋白饮食（n=24），蛋白含量8%，喂养至分娩，取出生体重低于正常对照组子鼠平均体重2个标准差以下的为IUGR鼠，记为IUGR组。选择研究的时间点分别为D1、3W、12W和10M。选I中国医科大学博士学位论文取雄鼠做为研究对象，每个时间点均选6只，分别来自6窝。采用外消化方法提取D1大鼠胰岛，内消化方法提取其他三个时间点的大鼠胰岛。采用双硫踪染色的方法鉴定胰岛。观察D1、3W、12W和10M各组大鼠的体重、胰