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时间:2019-03-12
《几种桉树焦枯病原菌的快速分子检测技术研究》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、分巧号S763.13单号:S20"3902四W巧化大学硕女学位论文几种按树焦钻病原菌的快速分子檢測技术硏究张静指导老师:朱天括巧巧专业名巧巧採保妒学研巧义向分子生衡学巧棘乂病理中的应用2015年5月ClassificationNumber:S763」3SichuanAriculturalUniversitgy’MastersDereeDissertationgRapidDetectionofbyFourDifferentKindsofM
2、olecularMethodsSichuanAriculturalUniversityChendu611100g,g,,P.R.ChinaJune2015,论文独削性声明本人郑重声明:所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行研究工作所取得的成果,除了文中特别加W标注和致谢的地方外,学位论文中不包含其他个人或。尽我所知集体已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得四川农业大学或其它教育机构的学一位或证书所使用过的材料。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示
3、了谢意。《,研究生签名:0jr年月日>f^J关于论文巧用授巧的芦明本人完全了解四川农业乂学有关保留,;学校有权保留并向国家巧关、使曲学位论文的规定即^部口或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被巧阅和借阅,可以采用影印、缩印或妇描等复制手段保存、汇编学位论文。同意四川农业火学可W用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。论文不保密。□本论文保密,在年解密巧适用本授权。__""(请在W上□内划V)-研究生签名:>?LT年^月/日导师签名■年《月日ywr)摘要
4、是桃金娘科Maceae按脚属炸如化■按树祀Mca如化spp.)(yrt)5胆物的总称,同时是世界著名的用材林树种和速生树种,与杨树、松树并称为林业上的H大速生造林树种。按树在我国西南、东南、长江中下游等地区的化态环境建设凶及解决生物能源问题中发挥着不可替代的作用,具有重要的经济、社会、生态效益。目前在我国西南地区由半知菌亚口的帝梗柱抱属真菌(砂/細irac/o況WWscopa州W2)引起的按树焦枯病严重危害着按树的林业生产建设。由于该病害发病症状极易与其他按树叶部病害混淆,传统形态学鉴定存在困难,因此建立能
5、够在病害发生早期快速诊断病害的分子生物学诊断方法迫在眉-睫,分别建立了基于ITS与factor1alha序列枝树焦枯。本研究选定不同的禪基因序列p病菌的双重PCR检测体系、巢式PC民体系、环介导等温扩增反应体系(LAMP)H种分子生物学诊断技术,W期为按树焦枯病的林业生产建设提供有力的技术保障。本研究联得如下结果:1IT-1aa.成功构建了基于S与factorlph序列按树焦枯病菌的双重PC民检测体系。该体系W按树焦枯病原菌況Mm为模版,分别打S和factor**-1alha序歹ij为鞋1区域oc
6、/幻況MW属和Cy"内油oc/幻成WWscop口Wwn设计了p,针对Cy/m办/-S--A-CYS1CY沿和邸1/EF1两对特异性引物,建立了基于属和种的双重PCR快速检一测技术。利用引物BCYS1/CYS2可1^将全部属的供试菌株扩增出条351bp一---A-1R大小的条带,单独用特异性引物EFS1/EF进行PC扩增仅病原菌扩増出条197bp大小的条带,同时使用2对引物时,病原菌可扩增出两条明亮条带。当体系退火温度°为53C时,DNA灵敏度检测限度达到450fg/叫野外田间时效检测结果显示,该体系能准
7、确检测出不同发病程度枝树组织上的病原菌,完全符合田间检测的要求。'-,2加(加eatene.针对写)c/fl成wmscoaniwz茜株的btubulin上保守序列极强的祀基^pg-------S-A的设因区域序列进行特异性引物BT1/BTA1和通用引物BTT1S/BTCYLTUBIR计和合成,分别利用常规PC民和巢式PC民技术对引物特异性和灵敏度进行检测和比较,同时对所建立的巢式PCR用于按树焦枯病原菌快速检测的田间时效性进行验证。结果eta-tene序-T--表明,利用bubuling列通用引物BT1S
8、/BTCYLTUBHI对全部供试菌株进行扩增一而单独使用特异性引物,所有参试菌株均可扩增出条500bp左右大小的条带;一----STS1/BTA1进行常规PC民扩增时仅病原菌能够扩增出条大小为148bp的明亮条1一
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