tlr2及tlr4在巨噬细胞识别非结核分枝杆菌中的作用研究

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1、分类号：单位代码：10193密级：学号：2012647硕士学位论文TLR2及TLR4在巨噬细胞识别非结核分枝杆菌中的作用研究TheresearchoftheroleofTLR2andTLR4inmacrophagerecognitionofnonmycobacteriumtuberculosis作者姓名：马莹聪学位类别：农学硕士专业名称：预防兽医学研究方向：动物微生物学与免疫学指导教师：钱爱东教授所在学院：动物科学技术学院2015年5月本研究由“国家自然科学基金项目（31272566，31272541）”资助Thisworkwa

2、ssupportedbygrantsfromNationalNaturalScienceFoundationofChina(No.31272566，No.31272541)独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在导师指导下，独立进行研究所取得的成果。尽我所知，除文中特别加以标注和致谢所列内容外，论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得吉林农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。本学位论文所有内容若有不实之

3、处，本人愿意承担一切相关法律责任和后果。学位论文作者签名：签字日期：年月日关于学位论文使用授权的声明1、本人完全了解吉林农业大学有关保留和使用学位论文的规定，即：研究生在校攻读学位期间所完成的论文及相关成果的知识产权属吉林农业大学所有，并同意将本论文的版权授权给吉林农业大学，学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。2、本人（同意/不同意，务必打印后填写）吉林农业大学将本论文版权授权给不同媒体进行电子出版、多媒体出版、网络出版以及其他形式出版（涉密学位论文解密

4、后应遵守此协议）。3、本人声明毕业后若发表在攻读研究生学位期间完成的论文及相关的学术成果，必须以吉林农业大学作为第一署名单位。学位论文作者签名：签字日期：年月日指导教师签名：签字日期：年月日摘要结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis，MTB)能逃避巨噬细胞的吞噬作用，而后在细胞内存活下来。机体的固有免疫系统在识别病原体的时候，Toll样受体家族发挥重要的作用，结核分枝杆菌感染机体后，巨噬细胞中TLR2及TLR4以及一些细胞因子都对MTB有免疫调节，递呈抗原的作用。同时，分枝杆菌又能反过来调节TLR2及T

5、LR4的表达，若持续刺激TLRs，机体就会产生负反馈调节，使结核分枝杆菌在机体内长期存活。近年来，非结核分枝杆菌得到了人们的广泛关注，与非结核分枝杆菌相关的研究也越来越多，但是关于Toll样受体如何通过巨噬细胞发挥抗非结核免疫作用的研究还相对较少。本文先介绍实验设计及处理方法。针对非结核分枝杆菌感染，采用了流式细胞术检测了RAW264.7细胞在0h、4h、12h、24h、48h、72h的凋亡及TLR4的表达量，用荧光定量PCR技术检测RAW264.7细胞和小鼠腹腔巨噬细胞在不同时间点TLR2及TLR4的mRNA的变化水平，用EL

6、ISA技术检测了不同时间点TNF-α的表达量变化并与对照组相比。通过制作病理切片以及抗酸染色切片，观察了感染非结核结核分枝杆菌后的小鼠肺和脾的病理变化以及菌体分布情况。结果显示：浅黄分枝杆菌和新金分枝杆菌感染均可促进RAW264.7细胞凋亡，并上调RAW264.7细胞和小鼠腹腔巨噬细胞的TLR2，TLR4以及RAW264.7细胞中TNF-α的表达水平，表达量在4h时表达量达到最高，且差异显著（P<0.05）。TLR2及TLR4基因上调水平与TNF-α的上调水平呈现出正相关性变化。感染非结核分枝杆菌的小鼠的肺及脾与生理盐水对照组相

7、比具有一定的病理变化。初步推测浅黄分枝杆菌和新金分枝杆菌可刺激RAW264.7细胞和小鼠腹腔巨噬细胞的TLR2及TLR4的表达水平上调，并影响RAW264.7细胞中TNF-α的表达。而且新金分枝杆菌的毒力要强于浅黄分枝杆菌的毒力。目前，对非结核分枝杆菌的相关研究越来越多，本文中提到的检测方法及实验结果可为今后的试验及研究提供理论依据和参考。我们也可以通过对TLR2及TLR4的深入了解，寻找以与TLRs相关的抗非结核药物,可能成为当前治疗非结核病的一种选择，并对非结核病的预防与治疗有重要意义。关键词：非结核分枝杆菌;巨噬细胞;TL

8、R2;TLR4IAbstractMycobacteriumtuberculosiscansurviveandproliferationincellsbyescapeimmunesurveillanceandattackfrommacrophage.Whenthe