smad核互作蛋白在克氏原鳌虾蜕皮激素信号通路中的功能

《smad核互作蛋白在克氏原鳌虾蜕皮激素信号通路中的功能》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号；１０３６４：单位代码密级：１２７２０巧４；学号么微々４义等学位论文＊－■Ｓｍａｄ核互作蛋白在克巧原馨邮蚁皮激素＾僧号通路＾中的功能ＳｍａｄＮｕｃｌｅａｒ虹化ｍｅｔｉｎｇＰｒｏｔｅｉｎ，ＳＭＰ１，Ｍｅｄｉａ化Ｓｔｈｅ＇．Ｅｅｄｓ化ｒｏｉｄＳｉｇｎａｌＴｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎｉｎＲｅｄＣｒａｙｆｉｓｈｙＰｒｏｃａｍｂａｒｕｓｃｌａｒｋｉａ研究生：韦道军＿—－．－指导教．脈朱保律副教授＇．合作指导教师：刘朝良教授申请学位口类级别；理学硕±

2、专业名称：乂生生顿学＇－■、研究方向；牛化与分子生物学所在学院：牛命科学学院答辩委员会主席；４２０１５年６月独创性声明本人声明所呈的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，陈了文中特别加Ｗ标注和致谢的地方夕ｈ论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研巧成果，也不包含为获得安徽农业大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：克每签字曰期；年作曰＾学位论文版权使用授权书

3、本学位论文作者完全了解安徽农业大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子文件，允许论文被查阅和借阅。本人授权安徽农业大学可＾以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，收录到《中国学位论文全文数据库》，可采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文，向社会公众提供信息服务。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）。签学位论文作者签名；斗／、玉名指导教师签名：字日期：年月签字日期：年月日＞ａ６又＾Ｐ＾工学位论文作者毕业后去向：通作单位：电话：信地址：邮编：摘要蜕皮

4、激素在虾蟹类动物的性别分化、生长发育和繁殖中具有关键的调控作用，然而其分子调控机制尚不明确。开展蜕皮激素信号途径的研究，对于阐明甲壳类动物的蜕皮机制，促进虾蟹养殖业的发展具有重要意义。SNIP1（Smadnuclearinteractingprotein）是一个与Smad相互作用并含有多个锌指结构的蛋白，具有特异性的DNA结合活性，参与了多个信号通路的调控。克氏原螯虾,也称小龙虾，因肉味鲜美广受人们欢迎，近年来已经成为重要的水产养殖品种。本研究旨在探讨SNIP1在克氏原螯虾蜕皮激素信号通路中的功能，取得的主要结果如下：1、本实验根据已有部分序列，设计特异性引物克隆了克氏原螯虾S

5、mad核互作蛋白1（SNIP1）基因的开放式阅读框序列（ORF，openreadingframe），生物信息学分析表明SNIP1基因的开放式阅读框序列全长为867bp，编码的蛋白质含有288个氨基酸残基，预测的成熟蛋白理论分子量分子量为34.9KDa，其等电点为6.18。其蛋白质C末端具有高度保守的FHA结构域，而其N端具有一段核定位序列,进化树分析表明克氏原螯虾SNIP1基因与无脊椎动物SNIP1基因亲缘关系最近。2、通过双酶切法构建了重组质粒pET28a-Pc-SNIP1，转化大肠杆菌BL21后采用IPTG诱导表达。转化至E.coliRosetta(DE3)，用不同浓度IP

6、TG进行诱导表达。SDS-PAGE电泳和Westernblot的检测结果表明克氏原螯虾SNIP1融合蛋白能够在原核表达系统中高效表达，重组蛋白分子量大小为35KDa左右。通过Ni柱亲和层析柱纯化重组蛋白，使用纯化的蛋白制备多克隆抗体，获得的抗体的效价为1：9000。3、提取克氏原螯虾肝胰腺、肠、肌肉、鳃、心脏、胃6个不同组织的总蛋白和总RNA，通过免疫印迹法和荧光定量PCR法分析克氏原螯虾在不同组织中的表达分布情况。结果表克氏原螯虾SNIP1基因在心脏中的表达量最高。4、注射蜕皮激素后克氏原螯虾肝胰腺中SNIP1基因的表达量显著增高。荧光定量PCR及Westernbloting

7、结果表明，通过siRNA干扰抑制SNIP1基因表达能够显著影响蜕皮响应基因在克氏原螯虾肝胰腺组织中的表达水平。综上所述，SNIP1基因是一个蜕皮响应基因，参与克氏原螯虾蜕皮激素调节的生理过程。关键词：克氏原螯虾；SNIP1；表达；蜕皮激素诱导AbstractEcdysteroidshasacriticalroleintheregulationofcrustacean’ssexdifferentiation,growthdevelopmentandreproduction.However,t