pcr测序技术在abo亚型鉴定和丙酮酸激酶缺乏症诊断中的应用

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1、上海交通大学硕士学位论文PCR测序技术在ABO亚型鉴定和丙酮酸激酶缺乏症诊断中的应用研究生：李慧敏专业：临床检验诊断学指导教师：王静教授指导小组成员：杨海鸥助理研究员蔡晓红副教授李怀远副教授培养单位：上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心答辩日期：2015年5月ShanghaiJiaotongUniversityMaster’sThesisApplicationofPCRsequencingmethodintheidentificationofABOsubgroupanddiagnosisofpyruvatekinasedeficienc

2、yMDcandidate:HuiminLiMajor:ClinicalLaboratoryDiagnosticsSupervisor:ProfessorJingWangSupervisoryCommittee:ResearchAssistantHaiouYangAssociateProfessorXiaohongCaiAssociateProfessorHuaiyuanLi,TrainingUnit:ShanghaiChildrensMedicalCenterShanghaiJiaotongUniversitySchoolofMedici

3、neSubmissionDate:May,2015上海交通大学硕±学位论文上海交通大学学位论文原创性声明明：，本人郑重声所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下独立进行研究工作所取得的成果。除文中己经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重。要贡献的个人和集体，均已在文中明确方式标明本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：如辟饼护ＩＩＩ上海交通大学硕壬学位论文上海交通大学学位论文版权使用授权书本学

4、位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可将本学位论文的全部或部分内、容编入有关数据库进行检索，可采用影印缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。□。保密，在＿＿年解密后适用本授权书本学位论文属于不保密＂＂（请在Ｗ上方框内打Ｖ）学位论文作者签名；指导教师签名：兔；日期：Ｏ年哀月５日日期如／王年女月扛日Ｄ／ＳＩＶ上海交通大学硕士学位论文PCR测序技术在ABO亚型鉴定和丙酮酸激酶

5、缺乏症诊断中的应用中文摘要ABO血型系统是临床输血医学和移植医学中最重要的血型系统，ABO血型的各种亚型造成临床血型鉴定困难，某些情况下可能使患者无法及时接受输血治疗或器官移植，延误治疗时机，甚至严重威胁患者生命。丙酮酸激酶缺乏症是一种常见的红细胞酶缺陷性疾病，主要引起慢性非球形红细胞溶血性贫血，为常染色体隐性遗传。PCR测序采用传统的Sanger测序法，其本身所具有的准确性高、易于标准化操作等优点使其被广泛的应用于临床检验诊断，大大提高了诊断的特异性和灵敏度。本研究主要是通过PCR测序技术对临床工作中遇到的ABO血型系统亚型及单基因遗传

6、病给予基因诊断。通过收集先证者临床信息，对先证者临床表型进行分析，收集患者外周血进行DNA的提取，设计引物进行PCR扩增、测序，进而利用生物信息学软件对先证者基因型进行分析，实现PCR技术在临床检验诊断中的应用。在对一例B(A)亚型的研究中，发现该患者ABO基因存在多个变异，其第6外显子区存在261del和c.297A>G二处杂合变异，第7外显子区存在c.526C>G、c.640A>G、c.646T>A、c.657C>T、c.681G>A、c.703G>A、c.771C>T、c.796C>T、c.803G>C、c.829G>A、c.930

7、G>A十一处杂合变异，以A101等位基因为标准序列进行比较，对照BloodGroupAntigenGeneMutationDatabase进行ABO等位基因突变分析，判断患者血型为B(A)04/O06血型。在对一例丙酮酸激酶缺乏症的研究中，发现先证者PKLR基因的7号外显子V上海交通大学硕士学位论文和9号外显子分别存在c.941T>C和c.1183G>C的复合杂合突变，先证者父亲和姐姐均为c.1183G>C杂合突变，先证者母亲为c.941T>C杂合突变，蛋白分析预测软件表明两个突变均引起蛋白结构的改变及酶活力的降低。关键词ABO血型系统；

8、亚型；丙酮酸激酶缺乏症；慢性溶血性贫血；PCR测序VI上海交通大学硕士学位论文ApplicationofPCRsequencingmethodintheidentificationofABOs