nhba镇静催眠作用机制研究

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1、也，《碱如皆净促硕±研究生学位论文北京协和医学院研究生院学校代码：１００２３：Ｓ２０００８０６０学号１２硕±学位论文（专业学位）ＮＨＢＡ镇静催眠作用机制研巧ＳｅｄａｔｉｖｅａｎｄＨｙｐｎｏｔｉｃＭｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆＮＨＢＡ所院；药物研究所姓名：唐丽娜指导教师；张建军研究员导师小组：张建军、徐瑞明、王贵彬学科专业：药学研究方向：神经精神药理／／完成日期：２０１５６１０ＴＨＥ别ＳＦＯＲ．ＭＳ．ＤＥＧＲＥＥＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｏｆＭ

2、ｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ＆ＰｅｋｉｎＵｎｉｏｎＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅｙｇ目录中文摘要１英文摘要３英文缩略词表６前胃８实验材料和方法１３１．实验材料１３１．１实验动物１３１２１３．药品与试剂１．３仪器与设备１４２．实验方法和实验设汁１４２１ＫＮＷ１４．对小鼠自主活动影响的测定ｔ２．２ＷｅｓｅｒｎＢｌｏｔ法测定小鼠脑组织中蛋白的表达１４２．３小鼠下丘脑磯酸酶ＰＰ１及ＰＰ２Ｂ活性的测定１６－２．．．．．１６．

3、４柱前ＯＰＡ衍生化ＨＰＬＣＥＣ法测定小鼠离体脑片温巧液中氨基酸水平２－．５ＨＰＬＣＥＣ法测定小鼠离体脑片温解液中单胺类神经递质水平１８２．６数据处理巧实验鄉２０一、ＮＨＢＡ对小鼠脑内ＣａＭＫＩＩ信号通路的影巧２０－１ＮＨＢＡ对小鼠下丘脑ｐＣａＭＫＩＩ表达的影响２０２侧脑室注射ＣａＭＫＩＩ憐酸化抑制剂ＫＮ９３对小鼠自主活动的影响２１３ＫＮ９３和ＮＨＢＡ对小鼠下丘－ＣａＭＫＩ侧脑室注射脑ｐＩ表达的影响２１４ＮＨＢＡ对小鼠下丘脑磯酸酶ＰＰ１及ＰＰ２Ｂ活性的影响２３－５腹腔注射Ｎ

4、ＨＢＡ对小鼠下丘脑ＰＰＫＡ表达的影响２４６侧脑室注射ＮＨＢＡ对小鼠下丘脑－ＳｎａｓｎｐｙｐｉＩ表达的影响２５二、ＮＨＢＡ对小鼠离体脑片温巧液中神经递巧水平的影响２６１ＮＨＢＡ对小鼠离体脑片温脖液中Ｇｌｕ和ＧＡＢＡ含量的影响２６ＴＨＥ別Ｓ．．ＦＯＲＭＳＤＥＧＲＥＥＣｈｉｎ的ｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃ的＆ＰｅｋｉｎＵｎｉｏｎＭｅ出ｃａｌＣｏｌｌｅｅｇｇ２ＮＨＢＡ对小鼠离体脑片温解液中单胺递质含量的影响２７巧论３０结论３３参考文献

5、３４综述３９致谢５１个人简历５３独创性声明错误！未定义书签。ＴＨＥ别ＳＦＯＲ．．ＧＲＥＥＭＳＤＥＣＷｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｏｆｓＰｅｋｎｏ打ＭｅｄｃａｌＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅ打ｃｅ＆ｉｇＵｎｉｉＣｏｌｌｅｅｙｇ中文搞要一种传统中葫天麻是，具有镇静催眠、抗惊厥、镇痛等作用。本课题組与中国医学科学院药物研究所植化室石建功教授课题组合作，发现天麻中分离得到的单体化合物ＮＨＢＡ能显著降低小鼠自主活动；协同戊己比妥钢诱导小鼠睡眠：显著减少觉醒时间，增加ＮＲＥＭ睡

6、眠时间，提示ＮＨＢＡ具有明显的镇静催眠作用。本实验室前期对ＮＨＢＡ镇静催眠作用机制进行了初步探究：受体亲和实验结果表明ＮＨＢＡ一Ａ和Ａ－ＵＶ法检测腺巧含量结与腺巧ｉ２Ａ受体均有定的亲和力和内在活性；ＨＰＬＣ果表明ＮＨＢＡ可使大鼠纹状体、脑干及丘脑组织的腺巧水平升高；免疫组化结果表ｃ－ｓ表达明ＮＨＢＡ显著増加小鼠下丘脑ＶＬＰＯ区Ｆｏ；联合应用ＧＡＢＡａ受体枯抗剂发现印防己毒素不能括抗ＮＨＢＡ的催眠作用一Ａ镇。本研究旨在进步探究ＮＨＢ静催眠作用机制。２＋一ａＣａＭＫＩＩ是种Ｃ／巧调蛋白依赖的丝氨酸／苏

7、氨酸蛋白激酶，激活胞内ＣａＭＫＩＩ信号通路可Ｗ促进觉醒，抑制睡眠。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法检测结果表明，腹腔注５ｍ／ｋ－射ＮＨＢＡ（ｇｇ）使小鼠下丘脑ｐＣａＭＫＩＩ的表达水平显著降低。自主活动实验结果表明，侧脑室注射ＣａＭＫＩＩ磯酸化抑制剂ＫＮ９３（Ｏ．ｌｎｍｏｌ／ｍｏｕｓｅ）可显著减少小鼠的自主活动，抑制率为５８．８％。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测结果表明，侧脑室注射ＫＮ９３－ＣａＭＫＩ和ＮＨＢＡ均可显著降低小鼠下瓦脑ｐＩ的表达水平。因此推测ＮＨＢＡ抑制小一鼠下丘脑ＣａＭＫＩＩ憐酸化可能是其发

8、挥镇静催眠作用的机制之。我们随后检测了ＣａＭＫＩＩ上下游相关蛋白ＰＫＡ、ＳｙｎａｐｓｉｎＩ的表达和磯酸酶ＰＰ１、ＰＰ２Ｂ活性。酶活ＮＨＢＡ（５ｍ／ｋｉ．．ＰＰ１活性显性实验结果表明，ｇｇ，ｐ）使小鼠下丘脑中的著升高了１６％，但对ＰＰ２Ｂ活性无显著性影响。Ｗｅｓｔｅｒｎｂ