mpn-pcr法检测鸡肉中空肠弯曲杆菌和产气荚膜梭菌

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4、膜梭菌不仅严重影响养禽业的发展，造成经济损失，同时也是造成人类胃肠炎等疾病的主要病原菌，严重威胁人类健康。目前，对食品中食源性致病菌定量检测的方法主要为活菌平板计数，耗时费力，很难计算准确的数量；MPN法（最大可能数）需要进行生化鉴定，同样操作繁琐，耗时费力；而(Real-time)PCR检测则无法判断样品中的细菌是否为活菌。因此，研究旨在建立针对空肠弯曲杆菌和产气荚膜梭菌的MPN-PCR检测方法，并初步应用于鸡肉制品中这两种病原菌的快速定量检测。首先，通过查阅相关文献，根据空肠弯曲杆菌特有的马尿酸酶hipO基因和产气荚膜梭菌各基因型均编码的c

5、pa基因设计特异性引物，将PCR技术与MPN法相结合，建立了MPN-PCR快速定量检测方法，用于定量检测鸡肉制品中的空肠弯曲杆菌和产气荚膜梭菌。MPN-PCR方法的整个检测过程包括：样品处理、增菌培养、模板制备、PCR扩增，实现了对食品中病原菌的快速定量检测。用PCR技术替代了生化试验，不仅可以进行定量检测，还可以避免了由于细菌进入VBNC（活的但非可培养）状态所造成的漏检，并且检测时间至少缩短了两天以上。其次，应用建立的MPN-PCR定量检测方法，对采集的186份鸡肉样品进行实际应用，其中鲜鸡肉66份，冻鸡肉120份。结果：空肠弯曲杆菌的阳性

6、检出率为17.2%，鲜鸡肉的阳性检出率为28.79%，冻鸡肉的阳性检出率为10.83%，含菌量范围在3.6-92MPN/g；产气荚膜梭菌的阳性检出率为15.59%，鲜鸡肉的阳性检出率为13.64%，冻鸡肉的阳性检出率为16.67%，含菌量范围在3.6-360MPN/g。综上所述，试验建立的空肠弯曲杆菌和产气荚膜梭菌MPN-PCR检测方法，具有特异性强、敏感性高、相对快速、高效等特点，能为养禽业中疾病的防控和禽肉类加工销售过程的监管提供有效的工具，对食品公共卫生安全领域中食源性病原菌的检测提供一定的帮助。关键词：空肠弯曲杆菌产气荚膜梭菌MPN-P

7、CR法快速定量检测IIIAbstractWiththeimprovementofpeople'slivingstandard,thedemandofpoultryproductsintheproportionofhumanfoodisincreasing.However,zoonoticpathogenssuchasCampylobacterjejuniandClostridiumperfringenscanpollutepoultryproducts,andcausebacterialdiseasesinhumans.Inaddition,i

8、tisagrowingtrend.C.jejuniandC.perfringensdonotonlycauseseriousdamagetothepo