ihnv糖蛋白的截短表达及免疫原性检测

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1、分类号Ｓ４１＿２＿学号２０１３８１３０３５＿為音、泉養乂聲硕壬学位论文ＩＨＮＶ糖蛋白的截短表达及免疫原性检测房珊珊指导教师卢形岩研究员专业学位农业推广硕±专业名称研巧方向鱼类病虫害防治答辩日期二〇—五年五月ＴＲＵＮＣＡＴＩＯＮＡＮＤＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮＯＦＩＨＮＶＧＬＹＣＯＰＲＯＴＥＩＮＡＮＤＤＥＴＥＣＴＩＯＮＯＦＩＭＭＵＮＯＧＥＮＩＣＩＴＹＢｙＦＡＮＧＳｈａｎ浊細Ｓｕｐｅｒｖｉｓｏｒ：Ｐｒｏｆ．ＬＵＴｏｎｇｙａｎＡＴ

2、ｈｅｓｉｓＳｕｂｍｋｔｅｄ化ＮａｎｊｉｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＩｎＰａｒｔｉａｌＦｕｌｆｉｌｌｍｅｎｔｏｆ化ｅＲｅｕｉｒｅｍｅｎｔｓｆｏｒｑＭａｓｔｅｒＤｅｇｒｅｅｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅＥｘｔｅｎｓｉｏｎＮａｎｊｉｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＮａｎｉｎＣｈｉｎａｊｇ，Ｍａｙ２０１５硏究生学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中己经注明引用

3、的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中Ｗ明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名度：年月＾曰学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南京农业大学可Ｗ将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可Ｗ采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编学位

4、论文。保密□，在年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密＂＂请在Ｗ上方框内打Ｖ（）学位论文作者签名：锦胃Ｗ玉年＾月《日喪寶导师签名：聲装．＞矿年＾月誤日卢目录摘要ＩＡＢＳＴＲＡＣＴＩｌｌ一第胃绪论１ＩＩＨＮＶ概述２Ｉ．ＩＩＨＮＶ基因型分离株２１．２ＩＨＮＶ的基因组特征２１．３ＩＨＮＶ编码蛋白３１．４ＩＨＮＶ的危害７２ＩＨＮ临床症状及流行特点８２．１病鱼的临床症状８２．２影响ＩＨＮＶ感染的因素８２．３ＩＨＮＶ的传

5、播途径９３检测Ｓ术９３．１细胞培养技术１０３．２免疫学技术１０３．３分子生物学技术１０３．４聚合酶链反应１０３．５环介导等温扩増技术１０４ＩＨＮ的防治１１４．１感染ＩＨＮＶ后的免疫机制１１４１．２輔２４１．２．１灭活病奉疫苗２４．２．２基因工程亚单位疫苗１２４．２－３ＤＮＡ疫苗１２４．３免疫佐剂１３５本研巧的目的与意义１３第二章ＩＨＮＶ糖蛋白的巧短表达１５１仪器与欄１５１１．１实验仪器５１．２实验材料１６

6、１ＩＨＮＶ糖蛋白的截短表达及免疫原性检测２实验方法１６２Ｇ蛋白基因序列的选择１．１ＩＨＮＶ截短６２．２ＩＨＮＶ基因组ＲＮＡ的提取１７２．３逆转录ＰＣＲ１７２．４ＰＣＲ产物的纯化与回收１８２．５目的基因连接Ｔ载体１８２－＂．６构建ｐＥＴ２７ｂＧｓ重组表达质粒２０２．６．１引物设计２０－－－双酶切２．６．２ＭＤ１８ＴＧｓ及ＥＴ２７ｂ载体２１ｐｐ２．６．３产物回收２１２．６．４目的基因与质粒载体的连接２１２．６．５重组质粒的提取２２

7、２．６．６重姐表达质粒的鉴定２３２．７Ｇｓ蛋白的表达及纯化２４２．７．１Ｇｓ蛋白的初步表达２４２．７．２可溶表达条件摸索２４２．７．３Ｇｓ蛋白的大量表达２５２－．７．４表达产物的ＳＤＳＰＡＧＥ分析２５２．７．５表达蛋白的复性Ｗ及纯化２６３实验结果２６３．１分析Ｇｓ蛋白基因２６３．２Ｇｓ蛋白基因的克隆及表达载体的构建２８３．３Ｇｓ蛋白的诱导表达２９３．４ＧＳ蛋ｅ的纯化３０４職３１４１．Ｇ蛋白目的基因片段的选择３１４．２表达载

8、体的选择３１４．３韻体３２第Ｈ章ＩＨＮＶ截短糖蛋白的免疫原性检测巧１仪器与材料巧１．１实验仪器巧１．２实验材料３４２实验方＆３４２．１兔抗血清的制备３４２－．２ＩＨＮＶＧｓ蛋白抗血清效价的检测３４２．３间接免疫巧光（ＩＦＡ）检测３５３