9种豆科牧草根际促生菌筛选及特性研究

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1、分类号密级UDC单位代码10733甘肃农业大学硕士学位论文9种豆科牧草根际促生菌筛选及特性研究Screeningplantgrowthpromotingrhizobacteriaresourcesandtheircharacteristicsoflegumes马文彬指导教师姓名姚拓教授（甘肃农业大学兰州730070）学科专业名称草学研究方向草地微生物生态论文答辩日期2015年5月25日学位授予日期2015年6月答辩委员会主席李春杰教授评阅人李彦忠教授刘晓静教授2015年6月甘肃农业大学2015届硕士学位论文项目来源本研究得到农业部国家牧草产业技术

2、体系(CARS-35)支持。I甘肃农业大学2015届硕士学位论文摘要为收集豆科牧草优良菌种资源，为后续生物接种剂（菌肥）研制提供优质菌源，本研究利用钼蓝比色法和高效液相色谱法，以紫花苜蓿(Medicagosativa)、扁蓿豆(Trigonellaruthenica)、箭筈豌豆(Viciasativa)、鹰嘴豆(Cicerarietinum)、小冠花(Coronillavaria)、鬼见锦鸡儿(Caraganajubata)、黄芪(Astragalusmembranaceus)、毛苕子(Viciavillosa)、甘草(Glycyrrhizaur

3、alensis)等9种豆科牧草为研究对象，从其根系及根际土壤分离、筛选根际促生菌（PGPR），测定菌株溶磷和分泌植物激素（生长素和赤霉素）特性，并利用乙炔还原法测定了扁蓿豆、箭筈豌豆、小冠花、毛苕子和黄芪5种植物根瘤的固氮酶活性，同时利用细菌形态、生理生化特性及16SrDNA序列分析对筛选出的优良促生菌株进行分类鉴定，主要结果如下：（1）从9种植物根际获得溶无机磷菌株分离物167个，根瘤菌5个，经过溶磷-1-1能力初步筛选，得到具有溶磷特性菌株66株，其溶磷量在1.3μg·mL~574.4μg·mL之间，溶磷量最大的是分离自鹰嘴豆根际的菌株PYR

4、S6。各菌株溶磷能力差异显著（P﹤0.05），溶磷菌株的溶磷量与其培养液pH值之间具有一定的相关性，有5种植物根际溶磷菌株的溶磷量与其培养液pH值之间呈现极显著负相关性（P<0.01）。与参比菌株Azotobacterbeijerinckii相比，本次分离的菌株有75.8%的溶磷量优于参比菌株。（2）66株溶解无机磷菌株分泌植物激素的能力各不相同，其中，供试菌株分泌-1IAA量在2.09~43.3μg·mL之间，能力最强的菌株为PBRS5，分泌GA量在1.02~30.34-1μg·mL之间，分泌GA量最高的为PGRP9，并且有7株菌既具有分泌IA

5、A能力，也兼具分泌GA的能力，其中以分离自鬼见锦鸡儿和毛苕子根际的菌株PGRP9、PGRS4和PMRS4表现较佳。（3）5种豆科牧草根瘤的固氮酶活性在1.21umolC2h4/g·h~11.87umolC2h4/g·h之间，根瘤固氮酶活性大小依次为：M-GL﹥B-GL﹥J-GL﹥X-GL﹥H-GL。（4）通过细菌形态观察、生理生化特定测定与分子生物学相结合的方法对15株优良PGPR（包括5株根瘤菌）进行分类鉴定，溶磷菌分属于6个属，分别为假单胞菌属、肠杆菌属、芽孢杆菌属、氮单胞菌属、固氮菌属以及克雷伯氏菌属，共8个种，即：Pseudomonasf

6、luorescens、Enterobactercloacae、bacillussubtilis、Azomonasagilis、Bacillusmegaterium、Azotobacterchroococcum、Azotobactervinelandii、Klebsiellaoxytoca；4株根瘤菌分属于2个属，为慢生根瘤菌属和根瘤菌属。关键词：豆科牧草；促生菌(PGPR)；溶磷菌；根瘤菌；植物生长素(IAA)、赤霉素(GA)II甘肃农业大学2015届硕士学位论文AbstractInpresentpaper,PlantGrowthPromotin

7、gRhizobacteria(PGPR)fromrhizosphereof9kindslegume(Medicagosativa,Trigonellaruthenica,Viciasativa,Cicerarietinum,Coronillavaria,Caraganajubata,Glycyrrhizauralensis,Viciavillosa,Astragalusmembranaceus)indifferentareasofGansu.Numbersofplantgrowthpromotingrhizobacteria(PGPR)wered

8、eterminedbyusingtheselectivemedium.ThePGPRstrainsweredeterminedbased