黄曲条跳甲p450基因介导抗哒螨灵机制的研究

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1、硕士学位论文黄曲条跳甲P450基因介导抗哒螨灵机制的研究作者姓名_________________________学科专业农业昆虫与害虫防治指导教师宾淑英副教授所在学院_________农学院论文提交日期2015年5月学位论文原创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文版权使用授权书本人完全了解学

2、校有关保留、使用学位论文的规定，即:学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意学校将本人的学位论文提交清华大学中国学术期刊（光盘版）电子杂志社全文出版和编入CNKI《中国知识资源总库》，传播学位论文的全部或部分内容。(保密的论文在解密后应遵守此规定）本学位论文属于：□保密，在_____年解密后适用本授权书。W不保密,同意在校园网上发布，供校内师生和与学校有共享协议的单位浏览。(请在以上相应方框内打“十）Researchonresistan

3、cemechanismsofPyridabenmediatedbyP450geneinPhyllotretastriolataADissertationSubmittedfortheDegreeofMasterCandidate：LiMeiSupervisor：Prof.BinShuyingZhongkaiUniversityofAgricultureandEngineeringGuangzhou，China分类号：S4学校代码：11347学号：20122090402001仲恺农业工程学院硕士学位论文黄曲条跳甲

4、P450基因介导抗哒螨灵机制的研究作者姓名：李美指导教师姓名、职称：宾淑英副教授学科专业名称：农业昆虫与害虫防治研究方向：昆虫分子生物学论文提交日期：2015年5月15日论文答辩日期：2015年5月26日学位授予单位：仲恺农业工程学院学位授予日期：年月日答辩委员会成员：主席：刘开启委员：马骏、贺华良摘要黄曲条跳甲Phyllotretastriolata是十字花科蔬菜生产中最难防治的虫害之一，分布极为广泛，主要为害我国南方广东、广西、福建等地。持续增加使用化学农药的剂量和喷洒药剂的频率，导致抗药性不断增强，增加了

5、防治的难度。黄曲条跳甲的扩散性、抗药性、世代重叠等原因，严重制约着我国十字花科蔬菜的产业发展。昆虫抗药性相关基因的研究揭示了昆虫抗药性的分子机理以及在发现新的杀虫剂靶标方面将发挥更大的作用。因此，我们通过黄曲条跳甲P450基因介导哒螨灵的抗药性分子机制研究，以期有助于发展黄曲条跳甲的新型防治策略。本研究从前期构建的黄曲条跳甲转录组数据库，初步获得了黄曲条跳甲的50条P450cDNA序列片段，为研究黄曲条跳甲P450介导的抗药性分子机理提供了有效的数据基础。通过同源性比较，可将其分为CYP4、CYP6、CYP9、

6、CYP306、CYP314、CYP315、CYP334、CYP345、CYP349、CYP353等基因亚家族。通过快速末端扩增技术（RACE）和分子克隆技术共获得19条黄曲条跳甲P450全长基因，对编码的全长基因序列进行生物信息学和系统发育分析。并通过构建黄曲条跳甲不同抗性品系，应用荧光定量PCR检测对P450基因在不同药剂胁迫压力下的差异表达分析。结果表明如下：1)黄曲条跳甲P450基因的鉴定及序列分析所研究的P450基因的开放阅读框为408-1704bp，共编码135-567个氨基酸。排列比对分析得到六个保

7、守域，其中包括P450共有序列(FXXGXXXCXG)血红素结合环和螺旋K中绝对保守的E(W)XXR元件。信号肽预测可知：Pstr_47基因的1-21氨基酸序列编码含有7个单肽构成的信号肽。经跨膜结构预测发现，Pstr_6、Pstr_26、Pstr_34、Pstr_36、Pstr_41、Pstr_45、Pstr_48存在一个跨膜结构域，而Pstr_44出现两个跨膜结构域，其他序列无跨膜结构。系统发育分析表明，黄曲条跳甲的P450按功能差异分配至CYP4、CYP6、CYP9和CYP3家族。Pstr_26、Pstr

8、_45、Pstr_36、Pstr_34、Pstr_41、Pstr_5聚为一支，与CYP6BQ家族遗传距离较近；Pstr_17、Pstr_44聚为一支，与CYP9Z4家族遗传距离较近；Pstr_50、Pstr_47、Pstr_6聚为一支，与CYP4Q家族遗传距离较近。其它单一的黄曲条跳甲P450基因与其它昆虫P450基因聚为一支，分属于CYP4、CYP6、CYP9和CYP3家族。其中，与