金黄色葡萄球菌artr的功能研究及rnaiii结合蛋白的鉴定

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1、UniversityofScienceandTechnologyofChina博士■位论飞论文题目金黄色葡萄球菌的功能研究及结合蛋合的鉴走作者姓名张地学科专撳生物学导师姓名孙全‘故梭二〇一五年五月完成时间肀豳科營弒水大營博士学位论文金黄色葡萄球菌的功能研究及结合蛋白的鉴定作者姓名：张旭学科专业：微生物学导师姓名：孙宝林教技完成日期：二一五年五月UniversityofScienceandTechnologyofChinaADissertationforDoctor'sDegreeFunctionalstudyofArtRandiden

2、tificationofRNAM卜：：：中国科学技术大学学位论文原创性声明本人声明所呈交的学位论文，是本人在导师指导下进行研宄工作所取得的成果。除己特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含任何他人已经发表或撰写过的研宄成果。与我一同工作的同志对本研宄所做的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：签字日期：’中国科学技术大学学位论文授权使用声明作为申请学位的条件之一，学位论文著作权拥有者授权中国科学技术大学拥有学位论文的部分使用权，即：学校有权按有关规定向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可以将学位论文

3、编入《中国学位论文全文数据库》等有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。本人提交的电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。保密的学位论文在解密后也遵守此规定。开□保密（年）作者签名签字日期：签字日期摘要摘要金黄色葡萄球菌是典型的革兰氏阳性条件致病菌，在环境中分布广泛。近年来，金黄色葡萄球菌已成为主要的临床感染菌，医院内每年都会有数以百万的金黄色葡萄球菌感染发生。金黄色葡萄球菌感染能够引发的症状有食物中毒、溃疡、心内膜炎、骨髓炎、肺炎等，甚至引起败血性休克而导致死亡。金黄色葡萄球菌之所以能引起如此多的病症

4、，是因为它能分泌多种致病因子，其中溶血素是非常重要的毒素之一。在感染过程中，这些毒性因子受到了广泛而精细的调控，从而帮助细菌响应和适应各种复杂的环境。这些调控因子包括二元信号系统、转录调控蛋白和非编码等。我们在前期研究信号系统时，发现了一个与反向重复的。和分析证实，这个全长为，并将其命名为。序列分析和等实验表明，是金黄色葡萄球菌中所特有的一种它的表达受到群体感应系统的抑制。但是这种抑制效应不是通过群体感应系统常用的来实现，而是直接通过蛋白与的启动子相互作用来实现。基因敲除实验发现，的缺失影响了金黄色葡萄球菌溶血素的水平。而凝胶阻滞分析

5、实验证明，并不能直接结合溶血素的。于是我们寻找了溶血素相关的转录因子，发现突变株中溶血素的抑制因子的水平有所升高。通过凝胶阻滞分析和酶解等实验我们证实通过与上的一段区域与相互作用，促进了对的降解。这项研究鉴定了金黄色葡萄球菌属中一个新的毒性相关的，并且阐明它是通过与转录因子相互作用来实现其调控过程的。调控不仅局限于与靶的相互作用，可能有很多蛋白质参与其中。但是由于技术的限制，对金黄色葡萄球菌中相关的蛋白质知之甚少。我们通过前期的研宄工作成功建立了利用融合适配体（简称进行蛋白质的实验体系，选取了金黄色葡萄球菌中重要的—对其结合蛋白进行钓

6、取。实验发现标记的能够较好被链霉亲和素磁珠捕获，用这个体系成功钓取了个能够结合的候选蛋白质。我们进一步通过蛋白质表达、凝胶阻滞分析验证了这些候选蛋白与的结合能力。选取的个蛋白质中，对具有降解活性，个蛋白（、、、、、、可以结合，没有检测出结合能力。同时选取了两个未鉴定出的，但属于摘要降解体的蛋白，发现它们并不能够直接结合。该实验表明金黄色葡萄球菌中可能有很多蛋白质结合，并有可能参与它的调控过程；的体系能够很好的运用于金黄色葡萄球菌结合蛋白的实验，并且成功鉴定出部分的结合蛋白质。深入研宄这些蛋白质对于调控以及金黄色葡萄球菌致病性调控的作用

7、，能够深化我们对细菌调控机制和复杂网络的认识。关键词：金黄色葡萄球菌，非编码，，溶血素，，结合蛋白，，AbstractABSTRACTStaphylococcusaureusisagram-positiveandopportunistichumanpathogen,whichiswidelydistributedintheenvironment.Thebacteriumhasbecomeamajorclinicalpathogenandcausesmillionsofinfectiouscasesinhospitaleveryyear

8、.S.aureuscancauseavarietyofinfectionsrangingfromlocalizedskininfectionstolife-threateningsystemicinfections.Th