角膜混浊小鼠模型获得及其分子基础研究

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1、分类号学号ＭＺ１２４７８ＵＤＣ密级壤叫义聲ＵＹＡＮＣＺＨＯＵＵＭＶＥＲＷＴＹ硕击学位冷文（专业型）角膳混浊小鼠模型获得及其分子基础研究倪俊达，江芬扬州００９风教授，陆兵副教授扬州大學，２２５指导教师姓名：薛黎申请学位级别：硕壬学科专业名称：兽医硕壬４：２０１５论文提交日期；２０１５年月论文答辩日期年６月２０１５学位授予单位；扬州大学学位授予日期；年６月答辩委员会主席；徐秦龙教授２０１５年日月学佐冷文角膜混浊小鼠模型获得及其分子基础研究－ＴｈｅＭｏｌｅｃｕ

2、ｌａｒＭｅｃｈａｎｉｓｍｏｆａｎＥＮＵＩ打ｄｕｃｅｄＣｏｒｎｅａｌＯｐａｃｉｔｙＭｏｕｓｅＭｏｄｅｌ研究生：倪俊达导师；薛整风教授陈兵副教授国家自然科学基金面上项目（３１３７２２６９）倪俊达Ｉ！角膜混浊小鼠模型获得及其分子基础研究角膜混浊小鼠模型获得及其分子基础研究论文摘要己焼基亚硝基服一（ＥＮＵ）是种人工合成的高效基因诱变剂，通过ＥＮＵ诱导小鼠可、获得大量的人类疾病动物模型，用于研究相关疾病的发生发展机制Ｗ及对突变基因的功能研巧一。本文通过ＥＮＵ诱变技术获得例角膜渴浊小鼠模型，并对其

3、突变基因进行成功定位与鉴定：，现汇报如下一１、ＥＮＵ诱变获得例角膜泡浊小鼠模型ＥＮＵ腹腔注射４０只雄性Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ（Ｂ６）小鼠，待其恢复生殖能力后与同品系雌鼠配种，、，并对其后代进行筛选获得多趾小眼、短尾、瞳孔散大、角膜混浊等异常表型小鼠。一本文其中例角膜混浊小鼠为研巧对象，将该小鼠与正常Ｂ６小鼠配种３，观察并记录６只后代，其中１５只小鼠具有角膜混浊表型。姐织学分析角膜混浊小鼠眼球发现，突变小鼠角膜基质层可见明显的新生血管，成纤维细胞明显增多，角膜上皮出现明显的角质层且通透性増加。２、角膜漏浊小鼠突变基因

4、的定位将Ｂ６背景角膜混浊小鼠与ＤＢＡ（Ｄ２）小鼠配种获得Ｆ１代小鼠，再将Ｆ１代小鼠继续回交野生型Ｂ６小鼠获得［（Ｂ６ｘＤ２Ｆ１ｘＢ６Ｎ２。１突变杂合子所生Ｎ２代小鼠）］代小鼠筛选Ｆ６口只，其中％只小鼠携带角膜混浊表型。突变基因连锁分析结果显示，突变基因与微卫星Ｄ１２Ｍｉｔ２８５连锁（ＬＯＤ值３．７８），初步将该基因定位于口号染色体上。在此基础上继续选择可用的微卫星对该突变基因进行精确定位，最终将该突变基因定位于１２号染色体９．０４ｃｍ之内。３、角膜混浊小鼠突变基因的鉴定通过对突变基因定位区域内逐个基因功能的分析

5、，发现与眼球发育相关４个候选基因：ｗｙｃｗＰＣＲ或ＲＴ－ＰＣ民扩、口加ｗＪ７、Ｓ如、ｏｓＷ，故分别増候选目的基因，切胶回收后测序，将Ｗ上测序结果与本中也野生型Ｂ６小鼠基因序列进行对比，筛查突变位点。序列比对结果显示在ｗｙｃｎ基因编码区１２１７ｂｐ处发生Ｔ到Ｃ的转换，导致ＭＹＣＮ蛋白编码区第４０６－位氨基酸发生由Ｖ－（额氨酸）到Ａ（丙氨酸）突变，该突变位于ＭＹＣＮ蛋白螺旋环螺旋结构域（ｂＨＬＨ）。一结论：本文获得例角膜病小鼠模型，为相关疾病的研究提供动物模型。首次发现扬州大学硕±学位论文３基因突变可引起小鼠

6、角膜混浊表型，但其机制不明Ｃ／７，深入研究将丰富对浑基因生物学功能的了解。？关键词：ＥＮＵ角膜絕浊；基因定位，基因人类疾病动物模型；；ｒａ倪俊达＝角腹混浊小鼠模型获得及其分子基础研究－ＴｈｅＭｏｌｅｃｕｌａｒＭｅｃｈａｎｉｓｍｏｆａｎＥＮＵＩｎｄｕｃｅｄＣｏｒｎｅａｌＯａｃｉｔＭｏｕｓｅＭｏｄｅｌｐｙＡｂｓｔｒａｃｔ－－ｅ－ＮｔｈｌＮｎｉｔｒｏｓｏｘｉｒｅａｉｓａｏｗｅｒｆｕｌｏｉｎｔｍｕｔａｅｎｔｈａｔｃａｎｅｎｅｒａｔｅｒａｎｄｏｍｙ（ＥＮＵ）ｐｐｇｇ－ｍｕｍｕｔａｔｉ

7、ｏｎｓｉｎｔｈｅｇｅｎｏｍｅ．Ｐｏｌｉｏｗｉ打ｇａｎＥＭＪｔａｇｅ打ｅｓｉｓａｌａｒｅ打ｕｍｂｅｒｏｆｍｏｕｓｅｍｕｔａｎｔｓ，ｇｗｉｔｈａｖａｒｉｅｔｏｆｈｅｎｏｔｙｐｅｓｗｅｒｅｒｅｃｏｖｅｒｅｄｆｂｒｔｈｅｓｔｕｄｏｆｅｎｅｆｕｎｃｔｉｏｎａｎｄｔｈｅｅ打ｅｒａｔｉｏｎｏｆｙｐｙｇｇ－ｈｕｍ舶ｄｉｓｅａｓｅｍｏｄｅｌｓ．Ｈｅｒｅｗｅｒｅｏｒｔａｍｏｕｓｅｗａｓｉｄｅｎｔｉ打ｅｄａｓａｎｅｗＥＮＵｉｎｄｕｃｅｄｍｕｔａｎｔ，ｐｗｉｔｈａｃｏｍｅａ

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