角倍蚜唾液蛋白的研究

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1、分类号Q968密级公开UDC学位论文角倍蚜唾液蛋白的研究StudiesonSalivaProteinsofChineseHornedGallAphid,Schlechtendaliachinensis马琳指导教师姓名杨子祥副研究员申请学位级别硕士专业名称生态学研究方向资源昆虫生态论文提交日期2015年5月论文答辩日期2015年6月学位授予日期2015年7月答辩委员会主席：评阅人：北京·中国林业科学研究院学位论文角倍蚜唾液蛋白的研究学位论文作者马琳指导教师姓名杨子祥副研究员指导小组成员杨璞副研究员申请学位级别硕士专业

2、名称生态学研究方向资源昆虫生态论文答辩日期2015年6月中国·北京DissertationfortheDegreeStudiesonSalivaProteinsofChineseHornedGallAphid,SchlechtendaliachinensisCandidate:MaLinSupervisor:AssociateProf.YangZixiangAssociateSupervisor:AssociateProf.YangPuAcademicDegreeAppliedfor:MasterSpecialit

3、y:EcologyDateofDefence:June,2015Degree-conferring-institution:ChineseAcademyofForestry独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进巧的研巧工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得本研巧生培养单位或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料一。与我同工作的同志对本研巧所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。

4、学位论文作者签名：Ｉ每日期年＾月＜日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解中国林业科学研究院有关保留、使用学位论文的规定，中国林业科学研究院有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和擺盘，允许论文被查阅和借闽。本人授权中国林业科学研巧院可将学位论文的全部或部分內容编入１、有关数据库进行检索，可＾采用影印、缩印或扫描等复制手段保存汇编学位论文。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）破＂学位论文作者签名：！导师签么＾＞寺＾＾乙叫年月才日ｉｄｔ月却日ｆ护摘要蚜虫

5、以特殊的刺吸式口器取食植物汁液，是重要的农林业害虫，但也有一些种类如五倍子蚜可以在盐肤木属（Rhus）植物上形成虫瘿（五倍子），是重要的资源昆虫。蚜虫唾液是蚜虫与植物相互作用的媒介，在蚜虫与寄主植物的互作中起着至关重要的作用，唾液腺是分泌唾液的器官。研究蚜虫唾液及唾液腺中的蛋白成分，将有助于揭示蚜虫-植物互作的机制，为控制有害种类的为害和有益种类的利用提供科学依据。本文主要以五倍子蚜的主要生产种――角倍蚜（Schlechtendaliachinensis(Bell)）干雌为研究对象，采用蛋白质组学方法分别对唾液和唾

6、液腺蛋白进行了检测和鉴定。对用Parafilm双层膜夹营养液法收集到的角倍蚜干雌唾液运用超滤膜浓缩法进行浓缩富集，对解剖得到的角倍蚜干雌唾液腺运用超声破碎辅助裂解液裂解的方法进行提取蛋白，对收集、提取到的唾液及唾液腺蛋白进行Bradford法定量检测，聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分离和液相色谱质谱联用（LC-MS/MS）检测，质谱检测得到的数据运用Mascot软件比对豌豆蚜（Acyrthosiphonpisum）蛋白数据库V2.1b进行检索，分析虫瘿内角倍蚜干雌唾液和唾液腺的蛋白种类和组成，为深入分析角倍

7、蚜与寄主植物的互作关系及虫瘿形成过程提供依据。主要结论如下：（1）角倍蚜干雌唾液蛋白提取方法采用双层膜夹营养液方法，收集角倍蚜干雌唾液，分别采用沉淀剂沉淀、真空冷冻干燥和超滤膜离心三种方进行浓缩，根据Bradford法蛋白定量、SDS-PAGE和LC-MS/MS3种检测方法的综合结果对3种浓缩方法进行评价。结果表明：超滤膜法浓缩得到的唾液蛋白在3种检测方法中的浓度、分离和分析效果均高于其他两种，在后续实验中采用此方法对角倍蚜干雌唾液进行浓缩。（2）角倍蚜干雌唾液腺蛋白收集方法利用解剖显微镜，通过对大量角倍蚜干雌的解

8、剖，对解剖角倍蚜干雌的方法进行了优化，能够快速、准确解剖和收集唾液腺。采用超声破碎辅助裂解液处理唾液腺，通过紫外分光光度计检测、Bradford法蛋白定量、SDS-PAGE和LC-MS/MS方法对唾液腺蛋白进行定量和分离，成功提取到了唾液腺蛋白。I（3）角倍蚜干雌唾液和唾液腺蛋白鉴定对通过LC-MS/MS检测得到的唾液和唾液腺肽段数据，采用生物信息学法方法进