虎杖不同提取物化学成分分析及降血糖作用研究

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1、分类号：单位代码：10193密级：学号：2012181硕士学位论文虎杖不同提取物化学成分分析及降血糖作用研究Analysisthechemicalcompositionoftheextractsandstudyonhypoglycemiceffectofpolygonumcuspidatum作者姓名：杨航学位类别：医学硕士专业名称：中药学研究方向：天然产物研究与开发指导教师：尹春梅教授焦连庆研究员所在学院：中药材学院二〇一五年五月独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在导师指导下，独立进行研究所取得的成果。尽我所知，除文中特别加以标

2、注和致谢所列内容外，论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得吉林农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。本学位论文所有内容若有不实之处，本人愿意承担一切相关法律责任和后果。学位论文作者签名：签字日期：年月日关于学位论文使用授权的声明1、本人完全了解吉林农业大学有关保留和使用学位论文的规定，即：研究生在校攻读学位期间所完成的论文及相关成果的知识产权属吉林农业大学所有，并同意将本论文的版权授权给吉林农业大学，学校有权保留送交论文

3、的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。2、本人（同意/不同意，务必打印后填写）吉林农业大学将本论文版权授权给不同剂体进行电子出版、多剂体出版、网络出版以及其他形式出版（涉密学位论文解密后应遵守此协议）。3、本人声明毕业后若发表在攻读研究生学位期间完成的论文及相关的学术成果，必须以吉林农业大学作为第一署名单位。学位论文作者签名：签字日期：年月日指导教师签名：签字日期：年月日摘要虎杖为蓼科植物虎杖（PolygonumcuspidatumSied.etZucc）干燥根及根茎，化学成分以二苯乙烯

4、类和蒽醌类成分为主。关于虎杖中α-葡萄糖苷酶抑制剂研究的报道集中在虎杖的水提取物上，并未明确活性成分的物质基础，各成分含量与活性作用之间关系也未进行探讨。虽然对于虎杖降血脂作用研究较多，但提取物化学成分对胰脂肪酶活性研究则未见报道。因此，明确虎杖提取物中α-葡萄糖苷酶和胰脂肪酶抑制剂的物质基础，对虎杖用于高脂型糖尿病治疗具有一定意义。本研究通过高效液相色谱法-二极管阵列检测器-蒸发光检测器（HPLC-DAD-ELSD）联用技术建立了虎杖药材的指纹图谱，以此对虎杖药材进行质量评价，选取较优质药材进行提取；以虎杖苷、白藜芦醇、大黄素的含量和出膏

5、率的综合加权评分为指标，以溶剂量、溶剂浓度、提取时间及提取次数为自变量，通过单因素试验和响应面试验对虎杖回流提取工艺条件进行优化，确定最佳提取工艺；虎杖总提取物水不溶部分通过环己烷：乙酸乙酯（2:1）、乙酸乙酯萃取，水溶部分通过大孔树脂柱层析（水、20%、40%、70%乙醇）技术得到不同活性部位的提取物；采用HPLC法对不同提取物中二苯乙烯类和蒽醌类化合物进行含量测定，采用苯酚-硫酸法对不同提取物中多糖成分进行含量测定；考察酶促反应的pH、温度及时间，优化了酶促反应的条件，对不同提取物抑制α-葡萄糖苷酶和胰脂肪酶活性作用及动力学特征进行了研

6、究；建立了链脲佐菌素糖尿病胰岛素抵抗大鼠模型，以空腹血清胰岛素、糖化血红蛋白、游离脂肪酸、超氧化物歧化酶、丙二醛、胆固醇及甘油三酯含量、胰岛素敏感指数和胰岛素抵抗指数为指标，比较虎杖总提取物、水溶物及水不溶物对胰岛素抵抗型糖尿病大鼠血糖血脂的影响。主要研究结果如下：10批不同产地虎杖药材的HPLC-DAD-ELSD指纹图谱的相似度均大于0.90，HPLC-DAD指纹图谱共有峰19个，HPLC-ELSD指纹图谱共有峰14个，建立了HPLC-DAD-ELSD指纹图谱的共有模式，确认了6个化合物（虎杖苷、白藜芦醇、大黄素、大黄素甲醚、大黄素-8-

7、O-β-D-葡萄糖苷、大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷）。通过比较样品总峰面积及6个化合物的峰面积，选取了质量较优的药材。响应面法优化回流提取虎杖最优条件为：溶剂量15倍，溶剂浓度66%，提取时间2h，提取次数2次。环己烷：乙酸乙酯（2:1）提取物和乙酸乙酯提取物中大黄素、大黄素甲醚、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷的含量最高，分别为57.14%和48.20%；不同提取物中二苯乙烯类含量：大孔树脂20%洗脱物含量最高为13.88%；大孔树脂总提取物水溶部分和水洗脱物中多糖含量较高，依次为55.83%

8、和54.75%。I虎杖不同提取物均有抑制α-葡萄糖苷酶活性的作用，抑制作用大小为：水溶物>水洗脱物>20%洗脱物>40%洗脱物>总提取物>剩余部分>水不溶物>环己烷：乙酸乙酯（2