花鳗鲡幼鳗vha、nka及fxyd11基因适应盐度变化的分子调节机制

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3、在校攻读学位巧间论文工作的知识产权单位属甫京师范大学。学校有权保存本学位论文的电子和纸质文措，可Ｗ借阅或上网公布本学位论文部分或全部巧内豁可Ｗ采用影印、复印等手段保存、汇编本学位论文？学校可臥向国家有关机关或机构送交论文的电子和纸质文档，允许论文被査间和借阅。（保密论文在解密后遵守此规定）：本学位论文属于保密论文：保密论文注释，密级保密期限为年。学位论文作名：指导教师签名：．曰親、苗曰巧：勺〇＞义让．玉如｜文？摘要广盐性鱼类渗透压调节的分子机制是目前鱼类生理学的研究热点。花媛綱航［ｍｗ７ｗｏｒａ／ａ是我国典型的降海徊游

4、性鱼类，巧饋麵媛苗须从海水迂移到淡）水中生长发育，在环境盛度变化的过程中，我们对花饋麵幼饋适应盐度的机制还不清楚，而且这方面的基础研究也相对滞后。本论文从基因克隆、ｍＲＮＡ表达、蛋＾－－ａｃｕｏ－白表达和酶活性四个方面入手ｌａｒＴｅＨＡＴＰａｓｅ、，围绕花饋麵幼饋ＶｙｐＶＨＡ（）＋＋一Ｋ－ＮＫＡＤ１１Ｎａ／ＡＴＰａｓｅ（）和ＦＸＹ适应盐度变化的调控机制进行研巧，并进步阐明调控基因在转录水平与蛋白质表达水平上的差异及其在适应盐度变化过程中的作用，揭示花鎮麵幼饋应对环境盐度变化的适应性调节机制。研究结果如下；（１）采用同源克隆和ｃＤＮＡ末端快速扩增（

5、ＲＡＣ巧的方法分离克隆了花饋麵－Ｖ－Ｔ－ＰＡＩＰａａｃｕｏｌａｒｙｐｅｆｓｅｐｌ基因全长ｃＤＮＡ，长度１７４化Ｐ，包括５０３个氨基酸的开ＯＲ＇＇放阅读框（Ｆ），８３ｂｐ的５末端非编码区（ＵＴＲ）化及１４化Ｐ的３末端非编码区（ＵＴＲ）。对推测的该基因氨基酸序列进行同源性比对和系统分析显示：花媛麵与其它鱼类该‘－基因的氨基酸序列相似度为９１９９％，与欧洲輯麵以化ｊｗｊｇｗ化０的相似度最高－－９９％Ｔ－ｌＡｒＰｉ基因的氨基酸序列极为保守（达到）。不同物种间的Ｖａｃｕｏｌａｒｙｐｅｆａｓｅｐ。＋＋－同时采用克隆方法得到花媛麵幼錢Ｎａ／ＫＡＴＰａｓｅａｌ

6、Ｗ及ＦＸＹＤ１１基因全长ｃＤＮＡ一。结果显示，ＮＫＡａｌ的ｃＤＮＡ３２巧ｂ３０６９序列花饋麵全长序列为ｐ，包含个ｂｐ的开放阅读框编码１０２２个氨基酸ＦＸＹＤＨ的全长ｃＤＮＡ序列，另外得到花媛麵（）７３９ｂ一２１３ｂ为，７０ｐ，它有个ｐ的开放阅读框其开放阅读框编码的个氨基酸中发现有ＡＴＰ１Ｇ１ＰＬＭＭＡＴ８的跨膜结构域，并且从基因角度证实了ＦＸＹＤ１１中的结构＿＿＋＋ＰＬＭＭＡＴＫ－ＡＴＰａｓｅ域ＡＴＰＩＧ１８是Ｎａ／的调节结构。＿＿＿ＰＣＲＲＴ－ＰＣＲＶＨＡ巧用实时巧光定量（）方法检测花媛綱ｐｉ基因在不同盐度不同时间段处理下飯和肾脏组织

7、中的ｍＲＮＡ表达量，结果显示：幼媛鮑和肾脏ＶＨＡｉｐ基因表达量在转移到盐度１０、盐度２５处理组后分别在１小时、６小时达到最大值。此外，盐度对幼優飯ＶＨＡｐｌ基因的ｍＲＮＡ表达量影响显著，其表达量的最大值相４４倍尸＜００１１５，ｉ当于淡水对照组的（．，并且幼饋在转移到盐度环境下天后其ＶＨＡ）ｐ基因的ｍＲＮＡ表达量与对照组相比没有显著变化巧＞０５。．０在幼媛转移到两个盐度（）１，３１，８７２１５处理姐后，６，２，２４４，，９６小时和天检测两个实验处理组和淡水对照组幼媛飯和肾脏中ＮＫＡａ