绵羊prlr,prlh和prlhr基因的克隆及其在下丘脑—垂体—性腺中表达的研究

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1、分类号密级UDC单位代码10733甘肃农业大学硕士学位论文绵羊PRLR,PRLH和PRLHR基因的克隆及其在下丘脑-垂体-性腺中表达的研究MolecularcloningofPRLR,PRLHandPRLHRgeneinovineandtheirsexpressioninthehypothalamus,pituitary,uterusandovary赵强指导教师姓名马友记教授（甘肃农业大学兰州730070）学科专业名称动物生产系统与工程研究方向羊生产系统论文答辩日期2015年5月26日学位授予日期2015年6月

2、答辩委员会主席柳纪省研究员评阅人张兆旺教授梁春年副研究员2015年6月甘肃农业大学2015届硕士学位论文MolecuLarcloningofPRLR,PRLHandPRLHRgeneinovineandtheirsexpressioninthehypothalamus,pituitary,uterusandovaryByZhaoQiangAThesisSubmittedToGansuAgricuLturalUniversityinPartialFulfillmentoftheRequirementsForMas

3、terDegreeSupervisor:Prof.MaYouJiCollegeofAnimalScience&TechnologyGansuAgriculturalUniversity,Lanzhou,P.RChina730070CommencementinJune,2015甘肃农业大学2015届硕士学位论文项目资助甘肃省农业生物技术研究与应用开发项目（GNSW-2012-19）、国家科技支撑计划项目(2011BAD19B02-2)。甘肃农业大学2015届硕士学位论文摘要催乳素（PRL）是由垂体前叶合成的多肽激

4、素，通过与其受体（PRLR）结合而发挥众多的生理功能，研究也发现催乳素释放激素（PRLH）及其受体（PRLHR）与PRL的分泌有关。本研究以绵羊为实验材料，以下丘脑-垂体-性腺轴为研究对象，运用分子生物学、免疫组化、荧光定量的方法对PRLR及PRLHR的具体表达情况作初步研究，其结果如下：（1）成功克隆了PRLR,PRLH和PRLHR。对PRLR基因序列进行同源性比对和进化树建立显示，其与藏羚羊的基因序列最接近；预测PRLR基因编码581个氨基酸的蛋白序列，其分子量为65.23kDa，等电点为pI5.12，且P

5、RLR蛋白不太稳定；预测PRLHR编码含有370个氨基酸的蛋白序列，其分子量为41.05kDa，等电点为pI9.41，且PRLHR蛋白不稳定。对PRLH和PRLHR基因序列进行同源性比对和进化树建立显示，绵羊的PRLH与山羊的同源性最高，而PRLHR则与藏羚羊的同源性最高。（2）三个基因在绵羊的四种组织中均有表达。PRLR以表达量最少的子宫为标准计算其他组织的表达量，结果卵巢的表达量显著高于其他组织（P＜0.05），其表达量由高到低依次是卵巢＞下丘脑＞垂体＞子宫。PRLH以表达最少的下丘脑为标准，子宫的表达量显

6、著高于其他组织（P＜0.05），组织的表达量由高到低依次是子宫＞卵巢＞垂体＞下丘脑；PRLHR以表达量最少子宫为标准，发现子宫和垂体之间的表达差异显著（P＜0.05）；组织的表达量由高到低依次是垂体＞卵巢＞下丘脑＞子宫。（3）PRLR和PRLHR在绵羊的垂体、下丘脑、子宫和卵巢组织中的不同细胞中均有一定量的表达。PRLR和PRLHR在垂体上远侧端的阳性反应着色深，阳性细胞多呈圆形或卵圆形；同时它们在下丘脑中均有阳性反应，但染色强度都较轻；PRLR在子宫腔、子宫内膜以及子宫腺等部位均有阳性产物，而PRLHR只在子

7、宫内膜处阳性反应明显，其他部位很少反应；卵巢中PRLR阳性细胞主要分布于卵母细胞和颗粒细胞中，相反PRLHR的阳性产物较少；除此之外PRLR的阳性反应区域还包括上述组织的血管和红细胞。关键词：绵羊；PRLR；PRLHR；qRT-PCR；免疫组化I甘肃农业大学2015届硕士学位论文SUMMARYProlactinisapolypeptidehormone,anteriorcellsofpituitaryaresynthesizeandsecretetheprolactin,it’splaymanyphysiolo

8、gicalfunctionsbyboundtoitsreceptor.WhilemanystudieshavefoundthatprolactinreleasinghormonerelatedwiththesecretionofPRL.Thestudyusedsheepastheexperimentalmaterial,andthehypothalamuspituitarygonada