三物白散干预恶性腹水研究

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1、学位论文三物白散干预恶性腹水研究StudyonInterventionofMalignantAsciteswithSanwubaiPowder龙柳伊指导教师姓名：由凤鸣教授申请学位级别：硕士专业名称：中医内科学论文提交时间：2018.03论文答辩时间：2018.05二○一八年五月成都中医药大学硕士学位论文中文摘要【目的】本研究选择肝癌H22恶性腹水模型为研究对象，观察三物白散对小鼠恶性腹水中H22细胞的生存率、细胞凋亡、细胞周期、Bcl-2蛋白表达情况的影响，从而观察三物白散干预小鼠肝癌H22细胞恶性腹水的效果，并初步探讨其作用机

2、制。【方法】1.H22腹水瘤小鼠模型的建立：于小鼠的右下腹部腹腔注射0.1mL肝癌H22腹水瘤细胞悬液（含H22腹水瘤细胞1×106个），观察小鼠的一般情况、体重增长情况、腹部增大情况，当腹部明显变大时，实验者用手指轻轻晃动小鼠腹部，能够感觉的细微波动感即为造模成功。2.三物白散干预恶性腹水研究：将造模成功的60只KM小鼠在造模48h后，随机分为5个组分别为模型组、阳性组、三物白散高剂量组、三物白散中剂量组、三物白散低剂量组，每组12只。分组后开始药物干预，连续用药干预7天，末次给药之后称取体重，用随机麻醉处死每组小鼠半数（每组6

3、只），无菌条件下开腹取腹水，测量腹水量及用台盼蓝计数方法测量H22肝癌细胞数量。绘制小鼠体重变化曲线、腹水形成箱状图，计算H22肝癌细胞生存率。每组余下的6只小鼠继续饲养直至死亡，记录生存期并绘制生存期箱状图。3.三物白散干预恶性腹水与细胞凋亡、周期及bcl-2蛋白表达的关系：取小鼠腹水FCM法检测细胞周期、细胞凋亡，WB法检测bcl-2蛋白表达情况。【结果】1.造模成功，腹水形成率100%。模型组接种H22细胞3-4天后，可以观察到小鼠腹部逐渐隆起，7-8天后小鼠腹部明显隆起增大，实验者用手指轻轻晃动小鼠腹部，能够感觉的细微波动

4、感，说明模型组小鼠恶性腹水已经生成。小鼠体重变化：从第4天开始，小鼠体重有明显增长趋势。而空白组小鼠腹部无明显变化，且体重呈缓慢增长趋势。2.与模型组比较，阳性组小鼠和三物白散高剂量小鼠生存期明显延长，差I成都中医药大学硕士学位论文异极显著（P<0.01）；中剂量组小鼠生存期延长，差异显著（P<0.05）。而三物白散低剂量小鼠的生存期明显低于阳性组，差异极显著（P<0.01）用台盼蓝拒染法检测各组小鼠腹水中肿瘤活细胞及总细胞数，得出腹水肿瘤细胞生存率。模型组、阳性组、三物白散高剂量组、中剂量组、低剂量组各组小鼠腹水肿瘤细胞分别为（

5、54.49±3.81）%、（31.98±1.62）%、（43.18±3.06）%、（43.21±1.91）%、（48.73±2.08）%。与模型组相比较，阳性组、三物白散高剂量组、中剂量组小鼠腹水中的肿瘤细胞生存率明显降低，差异极显著（P<0.01）。3.三物白散高、中、低剂量组小鼠腹水H22细胞处于G0/G1期百分比例分别为（48.76±1.07）、（43.11±1.15）、（34.84±1.83），很明显高于模型组（26.90±1.43），差异极显著（P<0.01）；三物白散高剂量组小鼠腹水H22细胞处于S期百分比例分别为：（

6、47.33±1.23），高于模型组（54.48±2.11），差异显著（P<0.05）；三物白散高、中、低剂量组小鼠腹水H22细胞处于G2/M期百分比例分别为：（15.03±0.85）、（6.23±0.72）、（12.39±1.33），明显低于模型组（18.62±0.71），差异极显著（P<0.01）。结果提示，三物白散作用于小鼠腹水中H22细胞主要是将H22细胞周期阻滞于G0/G1期和S期，进而减少G2/M期的细胞比例。细胞凋亡：模型组、阳性组、三物白散高、中、低剂量组的早期凋亡率分别为：（0.60±0.14）、（13.47±0.

7、77）、（1.35±0.09）、（1.17±0.12）、（0.93±0.05）；模型组、阳性组、三物白散高、中、低剂量组的晚期凋亡率分别为：（0.66±0.06）、（7.11±0.51）、（1.95±0.30）、（1.87±0.32）、（1.33±0.39）。早期凋亡率：与模型组比较，阳性组差异极显著（P<0.01），三物白散高、中剂量组差异显著（P<0.05），三物白散低剂量组差异无统计学意义（P>0.05）；与阳性组比较，三物白散高、中、低剂量组均异极显著（P<0.01）。晚期凋亡率：与模型组比较，阳性组差异极显著（P<0.0

8、1），三物白散高、中剂量组差异显著（P<0.05），三物白散低剂量组差异无统计学意义（P>0.05）；与阳性组比较，三物白散高、中、低剂量组均异极显著（P<0.01）。Bcl-2蛋白相对表达量：阳性组小鼠腹水H22细胞Bcl-2蛋白相对表达量为：（