dna电化学生物传感器的制备及对莠去津检测的研究

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1、山东农业大学硕士学位论文DNA电化学生物传感器的制备及对莠去津检测的研究姓名：时伟杰申请学位级别：硕士专业：环境科学指导教师：朱鲁生;艾仕云20080522缩略表A：adenine，腺嘌呤C：cytosine，胞嘧啶CV：cyclicvoltammetry,循环伏安法DNA：deoxyribonucleicacid，脱氧核糖核酸DPV：differentialPulseVoltammetry,示差脉冲伏安法dsDNA：doublestranded，DNAEDC：1-[3-(dimethylamino)propyl]-3一ethylcar

2、bodiimidehydrochloride，1一乙基．3．(3．二甲基氨丙基)碳二亚胺盐酸盐EIS：electrochemicalimpedancespectroscopy,电化学阻抗法G：guanine，鸟嘌呤GCE：glassycarbonelectrode，玻碳电极MB：methy’leneblue，亚甲基蓝NHS：N-Hydroxysulfosuccinimide，N．羟基琥珀酰亚胺PAMAM：polyamidoamine，聚酰胺-胺PBS：phosphatebufferedsaline，磷酸盐缓冲液R：linearcorre

3、lation，线性相关系数SDS：sodiumdodecylsulfate，十二烷基硫酸钠SSC：standardsalinecitrate，枸橼酸钠缓冲液ssDNA：singlestrandDNA，单链DNAT：thymine，胸腺嘧啶Tris．HChtrishydroxymethylaminomethanehydrochloride，三羟甲基氨基甲烷盐酸盐关于学位论文原创性和使用授权的声明本人所呈交的学位论文，是在导师指导下，独立进行科学研究所取得的成果。对在论文研究期间给予指导、帮助和做出重要贡献的个人或集体，均在文中明确说明。本

4、声明的法律责任由本人承担。本人完全了解山东农业大学有关保留和使用学位论文的规定，同意学校保留和按要求向国家有关部门或机构送交论文纸质本和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权山东农业大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。保密论文在解密后应遵守此规定。论文作者签名：导师签名：日期：l卯艿．西．2Z也j东农业大学硕士学位论文中文摘要DNA电化学生物传感器是近几年发展起来的一种全新的生物传感器。它既具有DNA杂交反应的高度特异性，又具有灵敏度高、响应快、操作方便、

5、无污染、价格低廉等特点，已被广泛应用于食品工业、疾病诊断、药物分析、环境监测等领域。DNA是生物体的基本遗传物质，一些化学物质易与其形成加合物。因DNA力n合物能够反映化学污染物与DNA的作用情况，因此可以用作生物标志物来评价和预测污染物的潜在致癌性。结合上述两方面内容，DNA电化学生物传感器有望提供一种全新的检测技术，在污染物的检测方面具有广阔的应用前景。在传感器的构建过程中，如何有效利用生物分子的固定技术及选择合适的固定材料决定着DNA电化学生物传感器的稳定性、选择性和灵敏性等主要性能。同时，选择合适的杂交指示剂也是DNA电化学生物

6、传感器研制的关键技术之一。本论文设计了两种新型的DNA电化学生物传感器，并研究了除草剂莠去津与DNA--者之间的相互作用。研究内容主要分为以下三部分：(1)用电化学氧化法使玻碳电极表面氧化生成羧基，利用偶联活化试剂将1．0代树状高分子(OlPAMAM)固定在玻碳电极表面，并通过共价结合固定ssDNA，制备了一种新型的DNA电化学生物传感器。以亚甲基蓝为指示剂，采用循环伏安法，示差脉冲伏安法等电化学方法对DNA电化学生物传感器进行了表征。结果发现，通过亚早基蓝与双链dsDNA作用的氧化还原电流的变化，可以识别和定量检测溶液中互补的ssDN

7、A片段。(2)采用紫外吸收光谱法、荧光光谱法以及电化学方法研究了莠去滓与鲱鱼精DNA的相互作用，探讨了莠去滓对DNA的损伤及其毒性作DNA电化学生物传感器的制各及对莠去津榆铡的研究用机制。结果表明，莠去津与鲱鱼精DNA作用后，莠去津的紫外光谱呈现减色效应，并有轻微红移现象，而其荧光光谱强度明显增强；循环伏安法显示莠去津与DNA作用能引起莠去津还原电位正移，峰电流减小。以上实验结果表明，莠去津平面分子能够嵌插到DNA双螺旋链中，形成较稳定的加合物。(3)将4．0代树状高分子(G4P枷AM)与壳聚糖按一定比例混合后，利用壳聚糖的成膜特性，将

8、G4PAMAM固定在玻碳电极上，然后利用EDC的偶联活化作用将氨基基团与ssDNA5’端的磷酸基团共价结合，选用[Co(phen)3]”做指示剂，制各了一种新型的DNA电化学生物传感器。通过循环伏安法、示差