皮肤切创愈合过程中FOXO1的表达及其在糖尿病伤口形成时间推断中的应用探讨

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1、温州医科大学硕士学位论文分类号：R89单位代码：10343学号：151006850硕士学位论文论文题目:皮肤切创愈合过程中FOXO1的表达及其在糖尿病伤口形成时间推断中的应用探讨研究生姓名：陈扬学科专业：法医学类型：学术型指导教师：喻林升教授范琰琰副教授二O一八年五月温州医科大学硕士学位论文论文题目：皮肤切创愈合过程中FOXO1的表达及其在糖尿病伤口形成时间推断中的应用探讨答辩委员会主席：周韧教授浙江大学医学部答辩委员会成员：陈国荣教授温州医科大学附属第一医院包其郁教授温州医科大学检验医学院论文答辩时间：2018年5月19日温州

2、医科大学硕士学位论文目录一、摘要中文摘要……………………………………………………………1英文摘要……………………………………………………………2二、论文全文缩略词…………………………………………………………5前言…………………………………………………………………6材料与方法…………………………………………………………7实验结果……………………………………………………………9分析与讨论…………………………………………………………19小结…………………………………………………………………22参考文献……………………………………………

3、………………23附录…………………………………………………………………26致谢…………………………………………………………………26综述…………………………………………………………………27参考文献……………………………………………………………42独创性声明…………………………………………………………54温州医科大学硕士学位论文皮肤切创愈合过程中FOXO1的表达及其在糖尿病伤口形成时间推断中的应用探讨中文摘要目的：研究皮肤切创愈合过程中FOXO1的表达与分布特征，探讨FOXO1在正常伤口及糖尿病伤口形成时间推断中的应用价值。方法

4、：取45只成年雄性小鼠C57BL/KsJ(由南京大学模式动物研究所提供)，体重25~30g，随机分为9组，每组5只，用作对照组伤口小鼠，腹腔注射戊巴比妥钠麻醉后，于背部皮肤剪毛处理，在其背部中央区域做一长1cm的皮肤全层纵行切口，作为对照组小鼠皮肤切创模型，分别装入笼中进行饲养。然后分别于切创后的0h、6h、12h、1d、3d、5d、7d、10d、14d，用乙醚将9组小鼠麻醉后，使用脱颈椎的方法将其处死，并以切创的创口为中心，取伤口及周边区域处1.5cm×2cm大小的皮肤。再取成年C57BL/KsJ（db/db）小鼠45只，作为

5、糖尿病组伤口小鼠，腹腔注射戊巴比妥钠麻醉后，于背部皮肤剪毛处理，在其背部中央区域做一长1cm的皮肤全层纵行切口，作为糖尿病组小鼠皮肤切创模型，分别装入笼中进行饲养。然后分别于切创后的0h、6h、12h、1d、3d、5d、7d、10d、14d，用乙醚将9组小鼠麻醉后，使用脱颈椎的方法将其处死，并以切创的创口为中心，取伤口及周边区域处1.5cm×2cm大小的皮肤。每个时间点的两组5只小鼠的皮肤样本都分为两部分，部分用于HE染色和免疫组织化学染色，另一部分用于Westernblot检测。通过HE染色观察伤口愈合的形态学变化；通过免疫组

6、织化学染色检测FOXO1的表达与分布特征，分析伤口中性粒细胞、单核细胞及成纤维细胞的细胞总数及FOXO1阳性染色细胞数，计算FOXO1表达的阳性细胞率；通过Western印迹法检测伤口FOXO1蛋白表达的相对水平。采用SPSS19.0forWindows软件对结果进行统计学分析，明确FOXO1表达的时序性变化，探讨FOXO1在正常伤口及糖尿病伤口形成时间推断中的应用价值。结果：（1）糖尿病组显示了延迟的伤口收缩和愈合。和对照组相比，糖尿病组中性粒细胞和单核细胞浸润延迟，中性粒细胞于伤后1-3d显著增多，单核细胞于伤后5d显著增多

7、，伤后7-10d的伤口仍可见较多中性粒细胞和单核细胞浸润。此外，和对照组相比，糖尿病组伤后3-14d的伤口成纤维细胞密度较低，伤后14d形成的瘢痕组织较疏松。（2）在对照组小鼠，FOXO1在表皮、毛囊、皮脂腺、血管内皮及真皮中少数的成纤维细胞呈现出弱表达；伤后6-12h创口周边区表皮及皮肤附件FOXO1表达增强，可见浸润的中性粒细胞和少量单核细胞表达FOXO1；伤后1-3dFOXO1以单核细胞阳性表达为主；伤后5-10dFOXO1以新生血管内皮细胞及成纤维细胞1温州医科大学硕士学位论文表达为主；伤后14d仍有少量成纤维细胞表达F

8、OXO1；其中伤后7d的FOXO1阳性细胞率达到高峰。FOXO1在对照组蛋白表达的相对水平呈现一定的时序性变化，其中伤后12h和伤后7d为FOXO1的两个表达峰值；（3）在糖尿病组小鼠可见FOXO1表达于毛囊、表皮、血管内皮细胞；伤后6-12h创口区可见浸润的中