利用转基因小鼠研究WNK激酶对肾脏钾离子通道的调控作用

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1、温州医科大学硕士学位论文分类号：R3单位代码：10343学号：151004725硕士学位论文论文题目:利用转基因小鼠研究WNK激酶对肾脏钾离子通道的调控作用研究生姓名：赵蓉学科专业：免疫学类型：学术型指导教师：刘珍二O一八年五月温州医科大学硕士学位论文论文题目:利用转基因小鼠研究WNK激酶对肾脏钾离子通道的调控作用答辩委员会主席：管敏鑫教授答辩委员会成员：白益东教授顾海华教授李红智教授论文答辩日期：2018年5月23日温州医科大学硕士学位论文目录中文摘要.......................................

2、.......................................................2英文摘要………………………………………………………………4主要英文缩略词表………………………………………………………7前言………………………………………………………………9材料与方法…………………………………………………………...11结果…………………………………………………………………...23分析与讨论………………………………………..…..………………36小结………………………………………………..…..…………

3、……39参考文献………………………………………………………………41附录………………………………………………………………46致谢………………………………………………………………47综述.…………………………………………………………………48参考文献………………………………………………………………57论文独创性声明………………………………………………………..701温州医科大学硕士学位论文利用转基因小鼠研究WNK激酶对肾脏钾离子通道的调控作用中文摘要目的：血钾的变化影响血压，而且肾脏在其中发挥重要作用。现已知，WNK激酶可以调控肾脏

4、钾离子通道的表达，但是WNK激酶是如何通过调控钾离子通道来调节血压的调控机制尚未阐明。本文的研究目的就是，利用WNK1(1-491)过表达的转基因小鼠，通过对比正常饮食以及高低钾饮食情况下，转基因小鼠和野生型小鼠的肾脏离子通道以及上游调控原件的表达差异，探索不同钾饮食引起血压变化的机制，以及WNK激酶在这一过程中的作用，进而为高血压的治疗提供新的理论支持。实验方法：1、用尾套法检测转基因小鼠和野生型小鼠的血压。2、用代谢笼收集转基因小鼠和野生型小鼠的饮水和尿量，用火焰分光光度计检测两组小鼠尿样中钠钾离子浓度，并计算尿总钠和尿总钾。

5、3、用眶静脉取血的方法分别采集转基因小鼠和野生型小鼠的血样，用火焰分光光度计测量两组小鼠血液中的钠钾离子浓度。4、通过分子生物学方法如实时荧光定量PCR、免疫印迹、免疫荧光等技术检测转基因小鼠和野生型小鼠肾脏钠钾离子通道以及上游调控原件WNKs激酶的表达情况。5、利用高低钾饮食刺激转基因小鼠和野生型小鼠，并且利用上述方法来观察两组小鼠的各项生理指标以及相关蛋白表达的变化情况。实验结果：1、与野生型小鼠相比，转基因小鼠的血压明显降低。2、转基因小鼠血钠和血钾明显低于野生型小鼠。3、转基因小鼠肾脏离子通道蛋白NCC、ROMK的表达量明

6、显低于野生型小鼠，肾脏离子通道蛋白BK-α以及上游调控原件WNK1、WNK4的表达量明显高于野生型小鼠。4、转到低钾饮食时，两组小鼠的血压和尿总钠均增加，血钠、血钾和尿总钾均下降；在低钾饮食期间，转基因小鼠的血压、血钾和尿总钠仍低于野生型小2温州医科大学硕士学位论文鼠，尿总钠高于野生型小鼠，血钠与野生型小鼠没有差别。转到高钾饮食时，两组小鼠的血钠、血钾和尿总钾均增加，血压和尿总钠均降低；在高钾饮食期间，转基因小鼠的血压和血钠与野生型小鼠没有差别，血钾和尿总钾高于野生型小鼠，尿总钠低于野生型小鼠。5、转到低钾饮食时，两组小鼠的NCC

7、、WNK1和WNK4均增加，BK-α均降低；在低钾饮食期间，转基因小鼠的NCC低于野生型小鼠，BK-α高于野生型小鼠，WNK1和WNK4的表达量与野生型小鼠没有差别。转到高钾饮食时，两组小鼠的NCC均降低，BK-α、WNK1和WNK4均增加；在高钾饮食期间，转基因小鼠的BK-α和WNK1的表达量均低于野生型小鼠，其它的离子通道蛋白的表达量与野生型小鼠无差别。结论：WNK1（1-491）过表达的转基因小鼠体内存在钾代谢异常，与其体内NCC表达量低以及BK-α表达量高相关，从而引起转基因小鼠的血压低，而且上游的调控原件WNK1、WNK

8、4激酶也可能参与其中。与此同时，转基因小鼠与野生型小鼠在低钾饮食和高钾饮食的刺激实验，也可以间接说明WNK激酶对血钾和血压的变化有一定影响。这为进一步研究血钾变化引起血压变化的机制提供新的思路，以及探讨WNK激酶在体内的调节作用具有重要的意义。关键