Rap1对细胞能量代谢的影响及对肝细胞癌发生发展调控的研究

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1、温州医科大学硕士学位论文分类号：R392单位代码：10343学号：151004731硕士学位论文论文题目:Rap1对细胞能量代谢的影响及对肝细胞癌发生发展调控的研究研究生姓名：高静学科专业：免疫学类型：学术型指导教师：吕建新二O一八年五月1温州医科大学硕士学位论文论文题目:Rap1对细胞能量代谢的影响及对肝细胞癌发生发展调控的研究答辩委员会主席：胡芳教授中南大学湘雅二医院答辩委员会成员：陈晓明教授温州医科大学沈耀副教授温州医科大学论文答辩日期：2018年5月26日2温州医科大学硕士学位论文缩略词表缩略词英文全称中文全称Rap1Ras-associatedprotein1

2、Ras相关蛋白1SiRNASmallinterferingRNA小干扰RNAKDKnockDown敲低WBWesternBlot蛋白质免疫印迹十二烷基磺酸钠SDS-PAGESodiumdodecylsulfatepage-聚丙酰胺凝胶电泳ATPadenosinetriphosphate三磷酸腺苷MMPMitochondrialmembranepotential线粒体膜电位四甲基罗丹明乙TMRMTetramethylrhodaminemethylester酯OXPHOSoxidativephosphorylationsystem氧化磷酸化系统OCROxygenconsum

3、ptionrate氧耗量ECARExtracellularacidificationrate胞外产酸率DAB3,3’-damiobenzidinetetra3,3′-二氨基联苯hydrochloridehydrate胺3温州医科大学硕士学位论文目录中文摘要1英文摘要3前言7材料与方法9结果31分析与讨论38参考文献39致谢41综述42独创性申明554温州医科大学硕士学位论文Rap1对细胞能量代谢的影响及对肝细胞癌发生发展调控的研究中文摘要研究背景：肝癌是常见的消化道恶性肿瘤之一，其全球发生率和死亡率在恶性肿瘤中分别占据第六位和第三位。我国肝癌的发生率和死亡率在恶性肿瘤中

4、分别占据第四位和第三位。早期肝癌生存期可超过5年，而晚期肝癌生存[2]期只有3个月左右。因此研究肝癌发生发展的机制具有重要的意义。能量代谢重编程是肿瘤的特征之一，不仅为肿瘤细胞生存提供能量，还为肿瘤细胞生存所需物质的生物合成提供原料，对于肿瘤的增殖、迁移和侵袭具有重要的意义。线粒体作为细胞能量代谢中心，其功能的改变必然会参与肿瘤细胞能量代谢重编程的过程当中，因此线粒体异常在肿瘤细胞的发生发展中发挥着重要的作用。Rap1属于小分子G蛋白Ras超家族，主要表现为无活性的GDP结合形式和有活性的GTP结合形式，调节包括细胞粘附，迁移，极性，分化，生长和血管生成在内的多种细胞过

5、程，与胃癌、卵巢癌、前列腺癌等多种癌症的发生、发展相关。目的:1.Rap1是小分子G蛋白Ras超家族成员，在鸟苷酸交换因子的作用下由无活性状态转变为有活性状态，通过与其他蛋白相互作用来发挥作用。多项研究表明Rap1参与多种细胞过程，如细胞生长与分化等，促进胃癌、卵巢癌、前列腺癌等多种癌症的发生发展。然而，关于Rap1在肝癌中发挥的作用目前尚不清楚，因此我们想通过此项研究来明确Rap1对肝癌的发生发展是否有一定的影响。我们从组织水平和细胞水平对Rap1于肝癌的关系进行了研究。2.为了明确Rap1是否确实影响肝癌的发生发展进程，我们对Rap1敲低的肝癌细胞进行体外细胞生物学

6、功能变化分析。3.已有研究表明，中枢神经系统中的Rap1参与机体能量平衡和葡萄糖稳态；Epac2-Rap1信号调节心脏内氧自由基的产生。然而，关于Rap1对线粒体的功能及细胞能量代谢之间的具体的影响及相关机制尚不清楚。因此，我们想通过此项研究来明确Rap1对线粒体功能及细胞能量代谢是否有一定影响及相关影响机制。我们对Rap1敲低的肝癌细胞进行线1温州医科大学硕士学位论文粒体功能相关实验，并且对细胞代谢途径进行了分析。4.线粒体是细胞能量工厂，癌症的发生发展离不开线粒体的作用。如果Rap1在肝癌的发生发展中起到一定的调控作用，且Rap1能够影响线粒体功能及细胞能量代谢，那

7、么Rap1能否通过影响线粒体功能及细胞能量代谢进而影响肝癌的发生发展？如何影响？方法:1.首先，我们对TCGA数据库肝细胞癌组织和正常癌旁组织基因芯片进行分析，对28个病人的肝细胞癌组织及正常组织进行免疫组织化学染色实验，对20个病人的新鲜肝细胞癌组织及正常组织进行WesternBlot实验，检测肝细胞癌与癌旁组织中Rap1的表达水平，比较其差异。2.选取一株肝癌细胞，通过转染siRNA,构建Rap1敲低的细胞模型。3.在Ctrl细胞和Rap1敲低细胞内进行细胞平板克隆实验、划痕实验、Transwell迁移实验、Transwell侵袭实验