基于大环内酯化脂肪酶筛选及其酶法合成环十五内酯的研究

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1、广西大学硕士学位论文大环内酯化脂肪酶筛选及其酶法合成环十五内酯的研究姓名：潘湘波申请学位级别：硕士专业：化学工艺指导教师：刘雄民20040401阳人学硕十论文《火环内酯化脂肪酶筛选及其酶法合成环十五内酯》大环内酯化脂肪酶筛选及其酶法合成环十五内酯的研究摘要环十五内酯属大环麝香类香料，广泛应用于香水、香精、化妆品、食品、医药等领域。目前该产品仅能以化学合成法生产。本文以∞一羟基十五烷酸为底物，以微生物脂肪酶为催化剂，合成环十五内酯。研究主要内容包括四个方面：(1)合成环十五内酯脂肪酶菌株的筛选；(2)脂肪酶生产条件的优化；(3)脂肪酶的分离纯化；(4)探讨影晌u一羟基十五烷酸关

2、环因素。首先，通过大量实验，筛选得到了十五株产脂肪酶的菌株，其中有六株所产脂肪酶具有催化合成环十五内酯的能力。进而重点对菌株GXU01与GXU03进行脂肪酶生产条件的探索。结果表明GXU01与GXU03摇瓶发酵产脂肪酶酶活力分别达20．69U／ml与16．89U／mI。二种菌株所产脂肪酶均在pH=7．0，反应温度为40。C时水解活力最高。其热稳定性为：GXU01脂肪酶在50。C下保温15分钟，酶活力损失仅20％：GXU03脂肪酶在50。C下保温15分钟，酶活力损失仅30％。然后，用硫酸铵分级沉淀发酵上清液，发现了GXU01脂肪酶活力主要分布在40％～50％的硫酸铵饱和度，而G

3、XU03脂肪酶活力主要分布在40％～60％的硫酸铵饱和度。并用凝胶色谱层析分离纯化GXU01脂肪酶得到了二种脂肪酶，分离后的二种脂肪酶可能均有催化合成环十五内酯的能力。最后，用自制曲人学硕十论文《人环内酯化脂肪酶筛选及其酶法合成环十五内酯》脂肪酶进行了环十五内酯合成研究，实验结果指出，脂肪酶最宜合成反应pH值为6．O，在环已烷中催化能力比在苯中要高。同时考察了不同脂肪酶在不同溶剂中催化合成环十五内酯能力，其中假丝酵母属来源的脂肪酶在环已烷中的催化环化能力比在苯中高。而青霉属的GXUl4正好相反，在苯中的催化环化能力为在环已烷中的3．4倍。结果给出了在OXU01脂肪酶催化作用下

4、15一羟基十五烷酸转化率高达88％，具有应用前景。关键词：∞一羟基十五烷酸；脂肪酶；环十五内酯2曲人学硕士论文《大环内酯化脂肪酶筛选及其酶法合成环十fi山酯)STUDYONSCREENlNGOFLACTONlZlNGLlPASEANDSYNTHESlZEOFCYCLOPENTADECANOLIDEABSTRACTCycIoDentadecanoIideisoneofthemacrocyclemusk．whichCOUldbeusedinmanyfieIdsbroadIY．suchasperfume．cosmetic．food，medicaIandetc．．Atpresent．

5、cycIopentadecanoIideCOUldbepreparedwithchemicaIsynthesisonlY．Inthispaper．cycloDentadecanoIidewaspreparedusing15一hydroxypentadecanoicacidasmateriaIandmicrobeIipasesascatalyst．TheresearchesincIuded：ScreeningofstrainsproducingIipaseusedtopreparecycIopentadecanoIide：OptimizationofIipasepreparat

6、ionconditions：PurificationofIipases：StudyofeffectsoncIose-cycIereactionof15一hydroxypentadecanoicacid．FifteenstrainsproducingIipasewereobtainedandsixstrainsoutofthefifteenstrainshavetheIactonizationabiIities．TheIipasePreparationconditionsofCandidasp．GXU01andCandidasp．GXU03werestudiedindetaiI

7、．TheresuItsshowedthattheIipaseactivitiesofCandidasp．GXU01andCandidasp．GXU03reached20．69u／mIand16．89u／mIrespectiveIY．ForthetwoIipases．theIipaseactivitiesweremaximaIat40℃andpH7．0．ForCand／daspGXU01．theIOSSofIipaseactivitywas20％at50℃for15minsandforCandidasp．