脐带血造血干祖细胞与脂肪干细胞共培养时作用距离的研究

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1、大连理工大学硕士学位论文脐带血造血干/祖细胞与脂肪干细胞共培养时作用距离的研究姓名：郝永杰申请学位级别：硕士专业：化学工程指导教师：刘天庆20080609大连理工大学硕士学位论文摘要造血干／祖细胞(hematopoieticstemprogenitorcells，HSPEs)在治疗贫血等血液疾病、白血病等癌症病人的造血重建、基因治疗和免疫治疗等方面有极重要的临床应用价值，因此多年来一直得到科研工作者和临床医生的高度重视和关注。虽然前人对HSPCs的体外扩增已经做了大量的实验研究，但由于培养条件对HSPCs

2、体外扩增的影响非常复杂，在不同的培养条件下，扩增效果差别很大，众多的影响参数均需要深入研究。造血干／祖细胞与基质细胞共培养时的有效作用距离还是一个悬而未决的问题，为此，本文采用修正的transwell改变脐带血来源的造血干／祖细胞(HSPcs)和人脂肪组织来源的脂肪干细胞(adiposederivedstemcells，ADSCs)的作用距离，获得最佳的细胞共培养距离。采用的方法是在无菌条件下采集正常足月产妇脐带血，与PBS缓冲液I；I等体积混合，利用Ficoll分离液(1．0779／m1)密度梯度离心(

3、2500rpm,25min)收获单个核细胞(mononuclearcells，删Cs)。共培养时先将ADSCs以2×105cells／ml密度接种到六孔板中，然后将收获的MNCs以1X108cells／ml密度接种到transwell小室内，所用的培养基是添加12．5％胎牛血清FBS和12．5％马血清HS的IMDM，最后将transwell小室放到调节好HSPCs和ADSCs之间的作用距离的六孔板中进行7天的共培养。其间每24小时进行细胞计数，观察细胞形态，绘制细胞生长曲线，并对扩增的细胞进行流式细胞仪分

4、析及多向诱导分化检测。实验结果显示，通过transwell共培养扩增细胞，细胞之间存在最佳的作用距离约为350Ⅱm，在这个作用距离下，造血干／祖细胞的扩增效果最好，MNCs扩增了15．1±0．2倍，CD34+扩增了5．0±0．1倍。关键词：脂肪干细胞；造血干祖细胞；transwell；共培养；脐带血；细胞间距脐带血造血干粗细胞与脂肪干细胞共培养时作用距离的研究Effectiveactiondistancebetweenumbilicalcordblood．dedvedhematopoieticstempr

5、ogenitorcellsandhumanadiposededvedstemceilsAbstractHematopoieticstemprogenitorcells(HSPCs)havebeenusedforbloodillnesssuchasanaemiaandlenkaemia,andforgenetherapyandimmunitytherapyete．Therefore，thegreatimportanceofclinicalapplicationisgreatlyconcernedbyrese

6、archersandclinicaldoctors．Thoughagreatdealofresearchworkaboutex-vivoexpansionofHSPCshasbeendone,expansionresultsvariedinaconsiderablywiderangeunderdifferentcultureconditionsbecauseofthecomplicatedrelationshipbetweenthem．Andlorsofcultureparametersneedtobei

7、nvestegaeddeeply．n圮effectiveintervalbetweenhematopoieticstemprogenitorcellsandfeedingcellsisstillinsuspense．Therefore．inordertoinvestigatetheoptimalcommunicationdistancebetweenumbilicalcordblood哪CB)derivedhematopoieticstemprogenitorcells(HSPCs)andhumanadi

8、posederivedstemcells(ADSCs)，transwellco．-cultureprotocolwasappliedandthedistancebetweenthetwoculturechamberswasadjusted．UCBmononuclcarcells(MNCs)wereisolatedbydensitygradientcentrifugationoverFicoll(1．077g／ml，propor