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时间:2019-03-11
《丝氨酸消旋酶突变影响小脑皮层发育的分子机制》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、分类号:R77单位代码:10343学号:151003548硕士学位论文论文题目:丝氨酸消旋酶突变影响小脑皮层发育的分子机制研究生姓名:宋丽平学科专业:眼科学类型:学术型指导教师:吴圣洲教授二O一八年五月论文题目:丝氨酸消旋酶突变影响小脑皮层发育的分子机制答辩委员会主席:鲁芳(四川省人民医院)答辩委员会成员:陈江帆(温州医科大学)周佳玮(温州医科大学)论文答辩日期:二O一八年五月二十一日温州医科大学硕士学位论文目录中文摘要..............................................2Abstract..
2、............................................4前言..................................................6材料与方法...........................................11结果.................................................24分析与讨论...........................................34参考文献..............
3、...............................36附录.................................................40致谢.................................................41综述.................................................43参考文献.............................................49学位论文独创性声明.................
4、..................561温州医科大学硕士学位论文丝氨酸消旋酶突变影响小脑皮层发育的分子机制中文摘要目的观察丝氨酸消旋酶(serineracemase,SR)突变对小脑皮层发育的影响,并探究其可能的分子机制。方法1.利用聚合酶链式反应(PCR)及特异性酶切的方法对小鼠进行基因型鉴定;并通过WesternBlot检测SR、NMDA受体各亚基在小脑发育过程中的表达水平;-/-2.尼氏染色的方法分析野生型和srr突变体(srr)小鼠出生后不同阶段小脑的整体形态以及小脑皮层各层的厚度;3.5-ethynyl-2'-deoxy
5、uridine(EdU)在体标记法研究srr突变对小脑颗粒细胞增殖和迁移的影响;4.免疫荧光方法观察srr突变对浦肯野细胞和伯格曼胶质细胞形态的影响;5.高效液相色谱(HPLC)方法检测srr突变对D型-丝氨酸、L型-丝氨酸、甘氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺含量的影响,以及突变体孕鼠喂食D型-丝氨酸后,新生小鼠小脑内D-型丝氨酸的含量;6.统计分析:所有的实验至少重复三次以上,所有实验统计结果均为平均值±标准误,Student’t-test用来分析两组实验数据之间的差异;Bonferonni校正后多因素方差分析用来分析比较多组之间实验数据的
6、差异。P<0.05表明检验组之间存在差异。结果1.SR在小脑发育关键期高表达,突变体内没有检测到SR,其小脑内D型-丝氨酸含量显著降低,补充D型-丝氨酸后小脑内含量升高;2.srr突变抑制小脑颗粒细胞迁移,导致突变体P7时小脑外颗粒层增厚,P12时恢复正常;3.突变体补充D型-丝氨酸后,P7时外颗粒层厚度恢复正常;4.突变体早期小脑甘氨酸含量升高,并且GluN2B表达上调。结论1.丝氨酸消旋酶在小脑发育过程中发挥着重要作用;2.srr突变引起D型-丝氨酸的减少,使小脑颗粒细胞迁移减缓,突变体早期小脑发育异常;2温州医科大学硕士学位论
7、文3.机体通过上调甘氨酸和GluN2B的水平,激活NMDA受体,使srr突变体后期小脑发育恢复正常。关键词丝氨酸消旋酶,D型-丝氨酸,小脑颗粒细胞,NMDA受体,迁移3温州医科大学硕士学位论文TheRolesofSerineRacemaseintheCerebellarCortexDevelopmentAbstractObjectToexaminetheeffectofserineracamase(SR)-codinggene,srrmutationinthedevelopmentofcerebellarcortexandexplo
8、rethepossiblemechanism.Methods1.Thegenotypesofmicewereidentifiedbypolymerasechainreaction(PCR)andHpyCH4Vrestrictionwi
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