保健食品中免疫球蛋白igg的测定

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1、保健食品中免疫球蛋白IgG的测定Determinationofimmunoglobulincontentinhealthfood━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━1适用范围本方法规定了初乳粉中免疫球蛋白IgG的测定。本方法适用于初乳粉中免疫球蛋白IgG的测定。本方法最小检出量：2.0μg。本方法最小检出浓度：当取样量0.1g，稀释至25mL，进样量20μL时，最小检出浓度为0.5mg/mL。本方法最佳线性范围：0.2~1.0mg/mL。2方法原理根据高效亲和色谱的原理

2、，在磷酸盐缓冲液条件下免疫球蛋白IgG与配基连接，在pH2.5的盐酸甘氨酸条件下洗脱免疫球蛋白IgG。3试剂3.1pH6.50.05mol/L磷酸盐缓冲液·········A液3.2pH2.50.05mol/L甘氨酸盐酸缓冲液········B液3.3IgG标准贮备液：称取IgG标准品（Sigma化学公司）0.0100g,用pH6.50.05mol/L磷酸盐缓冲液溶解并定容至10.0mL,摇匀，浓度为1.0mg/mL。3.4IgG标准系列溶液：以IgG标准贮备液，用pH6.50.05mol/L磷酸盐缓

3、冲液稀释成含IgG0.2mg/mL,0.4mg/mL,0.6mg/mL,0.8mg/mL,1.0mg/mL的标准系列。临用时配制。4仪器和设备HPLC仪具紫外检测器和梯度洗脱装置。5分析步骤5.1试样处理：称取0.1g（精确至0.001g）试样，用A液稀释至25.0mL,摇匀，通过0.45μm微孔滤膜后进样。5.2.1先用5倍柱体积的重蒸水洗柱，再用10倍柱体积的A液平衡柱，进样，按洗脱程序进行洗脱。5.2.2HPLC参考条件色谱柱：PharmaciaHI-TrapProteinG柱，1mL。波长：2

4、80nm移动相：A液B液进行梯度洗脱，见下表。梯度洗脱表：TimeFlowmL/minA%B%Gradient00.41000※4.50.4100065.50.40100615.00.40100615.50.41000622.00.4100066分析结果表示6.1计算式中x：试样中IgG的含量，g/100g；m：试样的质量，g；C：被测液中IgG的含量，mg/mL；V：试样定容的体积，mL。6.2结果表示：计算结果保留三位有效数字。7技术参数允许差:≤5%回收率:94.4~95.1%8色谱图IgG峰I

5、gG峰