胃癌中医证型与bcl-2、bax基因表达相关性研究

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1、学院代号10716学号010021421129专业代码450227密级陕西中医学院ShaanxiUniversityofChineseMedicine硕士学位论文胃癌中医证型与BCL-2、bax基因表达相关性研究学位申请人王亮专业名称中西医结合临床申请学位类型临床医学硕士专业学位指导教师姓名王建华论文提交日期2013年4月陕西中医学院学位论文独创性声明及使用授权声明学位论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，无抄袭及编造行为。除文中已经特别加以注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文

2、的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果并由本人所承担的法律责任。学位论文作者签名＿＿＿＿＿日期：年月日关于学位论文使用授权的声明陕西中医学院有权保留使用本人学位论文，同意学院按规定向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。本人授权陕西中医学院可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。可以公布（包括刊登）论文的全部或部分内容。（保密论文在解密后应遵守此规定）论文作者签名＿＿＿＿＿日期：年月日论文导师签名＿＿＿＿＿日期：年月日中文摘要目的：本

3、次研究是通过大样本的临床标本的收集，探索胃癌中医证型与目前已知的BCL-2、bax，2个胃癌标志物基因表达的相关性。通过组间的差异性分析，为胃癌中医证型分类提供理论和实验依据。对阐明基因与中医证候之间的关系，认识胃癌的发生机制,预测其转归,也是探求中医证候实质的关键所在。方法收集陕西中医学院第一附属医院2011年5月至2013年2月胃癌住院手术病人120例，收集病人的相关病史、术中情况和中医证候四诊等相关信息，依据ITAC2007[1]国际中医药肿瘤学术大会颁布的《中医胃癌诊疗指南（草案）》，将所有病人分为：肝气犯胃型、胃热伤阴型、瘀毒内阻型、痰湿凝结型、脾胃虚寒型、气血亏虚型共

4、6组，采用免疫组化法检测6组患者胃癌病理切片局部BCL-2、bax表达值，从而找出这两项指标在胃癌的中医证型中的分布的规律和特点，为胃癌的发病机制和胃癌的中医症候实质所在提供理论及实验支持。1.此次研究按照胃癌中医分型共收集120个病例，其中肝气犯胃型共23例，占19.2%；胃热伤阴型共21例，占17.5%；瘀毒内阻型共18例，占10.0%；痰湿凝结型共16例，占13.3%，脾胃虚寒型共29例，占24.2%；气血亏虚型共13例，占10.8%。其中脾胃虚寒型最多，证候所占比例从多到少为:脾胃虚寒型>肝气犯胃型>胃热伤阴型>瘀毒内阻型>痰湿凝结型>气血亏虚型。2.采用免疫组化法检测B

5、CL-2和bax表达，组织切片脱蜡和水化，将切片浸泡在柠檬酸钠缓冲液中微波抗原修复。以0.3%过氧化氢灭活内源性过氧化物酶和生物素，血清封闭，分别滴加BCL-2和bax一抗（工作浓度均为1:100）、4℃过夜孵化。加入标记的二抗孵育。加入DAB显色后苏木精复染、透明，封片。以PBS替代作为阴性[2]对照，用已知阳性切片为阳性对照。3.结果分析：BCL-2阳性表达时主要表现为细胞核和(或)细胞质中呈现棕褐色。bax表达阳性时主要表现为细胞质呈现淡黄色、棕黄色或棕褐色颗粒。对免疫组化结果评分采用密度和强度结合标准。结果判断：每张胃癌切片随机选取5个视野，每个视野计数50个细胞，分别根

6、据染色强度和密度进行评分。①染色强度：阴性为0分；淡黄色为1分；棕黄色计2分；棕褐色计3分。根据一个视野内阳性细胞所占比例；＜1%计0分；1%至25%计1分；25%至50%计2分；＞50%计3分，结果按照标准公式计算。分为阴性（-）、弱阳性（+）、中等阳性（++）、强阳性（+++）四个等级结论：1胃癌的中医证型分布有规律可循，其分布规律为：脾胃虚寒型>肝气犯胃型>胃热伤阴型>瘀毒内阻型>痰湿凝结型>气血亏虚型。2胃癌证型演变依照以下规律①以本虚辨证总体中医辨证是由肝胃不和向气血双亏发展，由阴虚发展为阳虚。②以标实辨证法分析演变顺序为脾胃虚寒-气滞血瘀—痰湿凝结及瘀毒内阻。3Bcl

7、-2、Bax与胃癌肿瘤分级、分期关系。Bcl-2、Bax在胃癌肿瘤不同肿瘤分级、表达不同，但与肿瘤临床病理分期无明显相关性。4胃癌中医证候与胃癌相关基因Bcl-2、Bax存在关联性，为中医辨证分型提供准确的切入点和客观理论依据。为中医靶向辨证施治提供有力证据。关键词：胃癌；中医证型；BCL-2；baxClinicalStudiesofTCMSyndromeofCgastriccancerandbcl-2,baxRelationsABSTRACTPurposesThisstudyi