egr-1特异脱氧核酶对大鼠颈总动脉球囊损伤术后pai-1和tf表达影响论文

《egr-1特异脱氧核酶对大鼠颈总动脉球囊损伤术后pai-1和tf表达影响论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、·中文论文摘要·Egr-1特异脱氧核酶对大鼠颈总动脉球囊损伤术后纤溶酶原激活物抑制因子1和组织因子表达的影响刖吾经皮腔内冠状动脉成形术(Percutaneouscoronaryintervention，PCI)是目前广泛应用的治疗冠心病手段之一，但术后的再狭窄(restenosis，RS)影iT其远期疗效。研究发现，血管平滑肌细胞(vascularsmoothmusclecell，VSMC)增殖所致血管内膜的增生是RS的重要病理特征，而血管成形术后早期富含血小板的血栓形成与VSMC增殖、迁移和转型密切相关。纤溶酶原激活物抑制因子．1(plasminogenacti

2、vatorinhibitor-1，PAl．1)是调节纤溶活性的关键因子，早期血栓的发生和发展同PAI．1的水平和活性升高有关，抑制高活性PAI．1将对早期血栓形成及血管再狭窄的防治起到重要作用。TF，又称组织凝血活酶，是目前已知最有效的凝血途径天然启动子。PTCA术引起动脉血管内膜撕裂，使TF释放至血液，启动外源性凝血机制，从而导致局部血栓形成。TF除了有促凝作用外，它作为细胞膜的受体，可介导SMC的迁移和增生，促进Rs发展。脱氧核酶(deoxyribozyme，nRz)是一种具有酶催化活性的DNA分子，作为一种基因抑制剂有着实际的治疗作用。早期生长反应因子一l(

3、earlygrowthresponsefactor-1，Egr-1)是一种锌指结构转录因子。它在动脉损伤等外界刺激下被激活，在早期血栓形成、VSMC的分裂、增殖和内膜增生等过程有着重要的作用。本研究拟在建立血管球囊损伤实验动物模型的基础上，进一步观察Egr-1的特异脱氧核酶(10．23DRz，ED5)对大鼠动脉损伤后PAI．1及TF的作用，探讨其在血管损伤后抑制内膜增生的作用机制。材料与方法一、合成ED5(由上海博亚生物技术有限公司合成)，碱基序列为：5’．￡￡鱼￡!Qg￡△GGCTAGClrACAACGA￡￡gQQQ△￡QI-3’，在其3’和5’端进行硫代修饰，

4、5’端用FITC标记，以便于在荧光显微镜下观察转染后基因的分布情况。两侧下划线所示部分为寡核苷酸识别序列。二、实验分组及动脉损伤的模型建立和基因转染损伤动脉：96只雄性Wistar大白鼠，体重在350-4009，随机分为4组。A组为假手术组；B组为Mgcl2对照组；C组为FuGene6对照组；D组为ED5+FuGene6转染组。用10％水合氯醛(0．3mg／g)麻醉后，于无菌条件下行颈正中切开，钝性分离左颈总动脉近心、远心端血流，用2F导管从颈外动脉插入左颈总动脉内，推入0．2mL生理盐水充盈气囊，反复抽拉球囊3次，造成左颈动脉内膜损伤。撤除球囊后，将2001．t

5、l含有FITC．ED5500pg、转染试剂FuGene6301．d、170p1lmmol／LMgcl2的溶液局部注入至损伤的血管节段内，使其在局部作用20分钟。转染治疗基因24h后，取治疗组大鼠局部血管的冰冻切片置于荧光显微镜下，用470．490nm光激发，可见残存血管内膜及中膜较对照组有大量绿色荧光分布，证明转染成功，显微镜下观察荧光强度、分布并拍照。FuGene6组局部注入200pl含有转染试剂FuGene30山、170p1mmoVLMgcl2的溶液：单纯损伤组局部注入2001．dlmmol／LMgcl2液；假手术组只进行颈动脉结扎，但不插入导管。术后结扎颈外

6、动脉，恢复血流，缝合颈部创口。术后局部使用青霉素以预防感染，喂食标准饲料，自由饮水。术后3、7、14、21d分批处死动物，处死前心脏采血用于ELISA检测。取病变处血管用于HE染色检测及免疫组化观察。三、所用试剂纤溶酶原激活物抑制剂1、组织因子ELISA试剂盒购至R&D公司；ED5购自上海博亚生物技术有限公司合成；转染试剂FuGene6购自Roche公司；Egr-1兔抗大鼠单克隆抗体购自SantacrBz公司四、统计学处理所有数据采用SPSSl3．0软件包进行统计分析，计量资料以均数4-标准差(茗士s)表示，均数比较采用单因素方差分析，组间的多重比较采用LSD检验

7、，P<0．05为差异有显著性。2实验结果一、血管病理形态学改变光镜下可见：假手术组，血管内膜由一层完整的内皮细胞覆盖，无内膜增生；大鼠颈总动脉拉伤后，可见内皮剥脱，说明球囊拉伤内膜模型成功；血管损伤后3d可见Mgd2对照组和FuGene6对照组内膜剥脱，尚无内膜形成，血管壁内膜附血小板血栓，ED5组无血栓形成；血管损伤后7天，Mgcl2组和FuGene6组血管内膜可见轻度增生，而ED5组不明显；损伤后14d内膜增生明显，内膜及中膜层有大量的增生细胞，排列紊乱，内弹力板模糊，两对照组比较差异无显著性；ED5组内膜增生明显减轻，差异有显著性(尸

8、-1免疫组