肠道树突状细胞亚群在食物过敏反应中的作用和机理初步研究

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1、分类号：学号：2010016,Ylll／I,'12rj'lIjIl4lllll4jj'l／I,rfollj'f19jlllll5llj,'l／4ll'／ll,,泰山匿亏弦Y2440954黍幽隧琴(f冤硕士学位论文⋯IIIIIIIIIIIIIIIWF2809054论文题目：肠道树突状细胞亚群在食物过敏反应中的作用和机理初步研究作者姓名：张善龙学科、专业：免疫学学位类型：科学学位型研究方向：粘膜免疫学指导教师：唐华教授宋文刚教授入学时间：2010年9月论文工作起止时间：2011年11月～2013年4月目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯”5符号说明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·8前‘言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯99刖舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．13结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯23讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．35结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．44参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。45综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．50致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．63原创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯．．．⋯⋯⋯64肠道树突状细胞亚群在食物过敏反应中的作肭机理初步研究J㈣黜研究生：张善龙专业：免疫学导师：唐华教授宋文刚教授中文摘要目的我们用肠道粘膜佐剂霍乱毒素(Choleratoxin，CT)来诱导食物过敏(Foodallergy)，以研究肠道树突状细胞(dendriticcells，DC)和其亚群在CT打破耐受、诱导食物过敏中的作用和机理为核心科学问题，以现代细胞免疫学和分子免疫学方法为核心技术。联合应用转基因和基因敲除小鼠，研究在天然免疫水平上CT对肠道各DC亚群的影响，以及肠道DC亚群在CT的作用下对获得性免疫反应的调节性功能的变化，以期明确肠

5、道DC和其亚群在CT诱导的食物过敏性反应中的作用以及可能的机制。为阐明食物过敏的机理做铺垫，为将来研制预防和治疗食物过敏的药物和方法提供理论基础。方法用IL．4．GFPxD011．10杂交F1代小鼠，磁珠分选其CD4十T细胞或流式细胞仪分选KJl26+CD4+T细胞尾静脉回输到Balb／c小鼠体内，给予Balb／c小鼠鸡卵清蛋白(Ovalbumin，OVA)或CT和OVA联合口服免疫，一周后取肠系膜引流淋巴结(Mesentericlymphnode，MLN)、派氏结(Peyer’Spatch，PP)制备单细胞悬液，流式细胞仪检测MLN、PP的CD4+T细胞中I

6、L．4表达水平，分析CT处理后能否诱导TH2反应。小鼠给予CT免疫，免疫后第一天、第三天、第六天分别取小鼠固有层(Laminapropria，LP)、MLN、PP制备单细胞悬液。对细胞悬液进行荧光抗体染色，流式细胞术分析不同时间点各DC亚群的变化并对各DC亚群中共刺激、分子的表达进行分析。1分选FoxP3．GFPxDOI1．10杂交Fl代小鼠的CD4+T细胞或KJl26+FoxP3。CD4+T细胞，尾静脉回输到Balb／c小鼠体内，给予Balb／c小鼠OVA或CT和OVA联合口服免疫，一周后取LP、MLN、PP制备单细胞悬液，流式细胞仪检测LP、MLN、PP的

7、KJl26+CD4+FoxP3+Treg表达水平，分析CT处理后能否促进肠道LP、MLN、PP的抗原特异性CD4+T细胞增殖，能否将FoxP3’CD4+T细胞转化为FoxP3+CD4+T细胞，从而证明CT处理后所产生的CD4+FoxP3+Treg是天然型CD4+FoxP3+Treg(naturalTreg，发育自胸腺)还是诱导性CD4十FoxP3+Treg(inducedTreg，由FoxP3’CD4T细胞分化而来)。我们还用FoxP3．GFP(C57BL／6背景)小鼠，分别给予小鼠OVA或CT和OVA联合口服免疫，一周后取肠道LP、MLN、PP制备单细胞悬液

8、，流式细胞仪检测LP、MLN、PP的C