缺血再灌注损伤时氧化应激对血视网膜内屏障的损伤作用及其机制研究

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1、上海交通大学博士学位论文缺血再灌注损伤时氧化应激对血视网膜内屏障的损伤作用及其机制研究姓名：童念庭指导教师：吴星伟教授专业：眼科学学号：0107249256研究方向：眼底病申请学位级别：博士培养单位：上海交通大学附属上海第一人民医院答辩日期：2013年5月本课题得到上海市卫生局中医药重大课题基金资助项目(GrantNo．2006ZD01)和上海市眼底病重点实验室开放项目(GrantNo．07222911)的资助。ShanghaiJiaotongUniversityDoctoralDissertationTheRoleofOxidati

2、veStressintheDamageoftheinnerBloodRetinalBarrierinIschemia／ReperfusionInjuryandtheMechanismStudyName：NiantingTongSupervisor：Prof．XingweiWuSpecialty：OphthalmologyStudentID：0107249256ResearchDirection：RetinaldiseaseDegreeApplication：Ph．DAffiliation：ShanghaiJiaotongUnivers

3、ityAffiliatedFirstPeople’SHospitalThesisDefenceDate：May，2013ThisworkwassupportedbytheKeyProgramofNationalAdministrationofTraditionalChineseMedicine，Shanghai，China(GrantNo．2006ZD01)andtheOpeningProjectofKeyLaboratoryofFundusDiseases，Shanghai，China(GrantNo．07222911)上海交通大学

4、学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：刍牛日期：．矽，多年j月8日上海交通大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本

5、学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密口，在年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密叫。(请在以上方框内打“√”)学位论文作者签名：镡日期：刀，；年r月参日⋯雌轹关吁吼纠弓年』矽日缺血再灌注损伤时氧化应激对血视网膜内屏障的损伤作用及其机制研究摘要目的：1．建立大鼠视网膜缺血再灌注(IR)模型，并观察氧化应激在血视网膜内屏障损伤中的作用。2．建立血视网膜内屏障的体外模型，应用缺氧再氧合(HR)损伤模拟体内IR损伤，并观察氧化应激在血视网膜内屏障体外模型损伤中的作用。

6、3．探讨P13K／Akt／GSK3∥p-catenin通路是否参与HR时氧化应激对血视网膜内屏障的损伤。方法：1．应用升高大鼠前房眼内压的方法建立大鼠视网膜IR模型，将大鼠分为control组、IR组和IR+diosmin组，运用视网膜电流图检测各组视网膜功能学改变，HE染色观察视网膜水肿的情况，应用伊文斯兰大鼠体内灌注和透射电子显微镜分别观察大鼠视网膜毛细血管的渗透性和内皮细胞之间紧密连接结构的完整性，并检测MDA的含量以及SOD、GSH．Px、CAT的活性以判断大鼠视网膜组织中氧化抗氧化体系的情况，其余的大鼠处死后采用实时定量RT

7、．PCR、WesternBlot以及免疫组织化学等方法观察VEGF、PEDF在视网膜组织中的表达和分布。2．原代培养牛视网膜毛细血管内皮细胞(BI也Cs)，取原代培养后传代至第5-9代的BRECs以1．5x105个／cm2细胞密度接种于Transwell膜上，建立稳定的血视网膜内屏障体外模型，并通过跨内皮细胞电阻、渗透性实验和细胞免疫荧光检测屏障功能和结构的完整性。对已经建立血视网膜内屏障的内皮细胞应用HR进行l干预。细胞分为空白组、control组、HR组和HR+NAC组，运用跨细胞电阻仪和示踪剂RD检测各组内皮细胞之间的跨细胞电阻

8、和渗透性，运用ROS探针CM．H2DCFDA检测各组细胞内ROS的含量，运用ELISA法检测各组内皮细胞分泌的VEGF和PEDF的含量。3．取原代培养后传代至第5-9代的BRECs建立血视网膜内屏障的体外模型，将细胞分为