白藜芦醇对组织工程化软骨的保护作用及其机制的实验研究

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1、分类号：R684.3密级：一般UDC:606.61编号：2010212585广州医学院硕士研究生学位论文白藜芦醇对组织工程化软骨的保护作用及其机制的实验研究Thestudyofresveratrolprotectiveeffectsandmechanismontissue-engineeredcartilage研究生：崔文岗导师：肖德明教授申请学位级别：医学硕士年级：二0一0级学科专业：外科学研究方向：骨外科、骨组织工程论文提交日期：二0一三年五月论文答辩日期：二0一三年五月学位类型：学术型学位授予单位：广州

2、医学院答辩委员会主席：评议人：二0一三年五月广州医学院硕士研究生学位论文白藜芦醇对组织工程化软骨的保护作用及其机制的实验研究Thestudyofresveratrolprotectiveeffectsandmechanismontissue-engineeredcartilage学科专业：外科学专业名称：骨外科、骨组织工程硕士研究生：崔文岗指导老师：肖德明教授广州医学院广州二0一三年五月目录中文摘要.................................................1英文摘要..

3、...............................................3主要符号表及中英文对照...................................6前言.....................................................7材料与方法...............................................9结果...................................................

4、.21讨论....................................................25参考文献................................................28结论....................................................30综述....................................................31附录..............................

5、......................37致谢....................................................38学位论文原创性声明......................................39中文摘要白藜芦醇对组织工程化软骨的保护作用及其机制的实验研究研究生：崔文岗导师：肖德明中文摘要背景与目的：骨关节炎(OA)是一种退行性关节疾病，是目前威胁着老龄人口健康的主要问题之一。尽管创伤是引起软骨细胞损伤，导致骨关节炎的最重要的因素，遗传基因也在OA

6、的过程中扮演着重要的角色。最近的实验结果显示软骨细胞在基因水平的表达改变是引起OA的一个重要因素，其中沉默信息调节因子SIRT1是目前研究的一大热点。SIRT1在生物体细胞中是调控其增殖分化、炎症、应激的一个重要蛋白，并与多种老龄疾病相关联，如II型糖尿病，老年痴呆和骨质疏松等。实验研究表明，OA软骨细胞内的SIRT1的水平与软骨细胞的细胞外基质（EMC）和细胞在炎症中存活密切相关。本实验旨在观察SIRT1表达在炎症环境中的调控改变，研究白藜芦醇对骨髓间充质干细胞组织工程化软骨的保护作用并进一步探讨其相关保护

7、机制。材料与方法：本实验首先将体外单层扩增的大鼠骨髓间充质干细胞在藻酸钠微球中行三维立体软骨细胞定向培养，其定向分化程度通过甲苯胺蓝染色，免疫组织化学等方法鉴定。然后将从微球释放的分化软骨细胞接种于壳聚糖-明胶复合支架，培养3周后制备组织工程化软骨，其内部软骨细胞以及支架形态用扫描电镜和激光共聚焦显微镜观察。将白细胞介素（IL）-1β作用于该细胞-支架材料上，并用白藜芦醇和（或）特异性的抗整合素β1亚单位抗体进一步干预，蛋白印迹法检测II型胶原、基质金属蛋白酶（MMP）-13以及核因子-κB的表达，扫描蛋白印

8、迹条带灰度并进行半定量计算，采用方差分析进行统计学处理。结果：在定向培养过程中，藻酸盐微球中的软骨细胞在细胞周围可形成明显的细胞外基质，促进分化，软骨细胞特异性II型胶原和蛋白聚糖表达显著增高。定向分化后的软骨细胞在壳聚糖-明胶复合支架材料上能良好的贴壁、增殖和迁徙，形成组织工程化的软骨。蛋白印迹半定量分析：软骨II型胶原对照组表达量1广州医学院硕士学位论文0.484±0.006；白藜芦醇干预后表达