白细胞介素33在角膜上皮细胞免疫炎症反应中的作用

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1、摘要目的：(1)探讨微生物抗原通过TLR及相关信号通路介导角膜上皮细胞IL一33产生，并揭示工L一33在Th2主导的固有免疫反应中的潜在作用。(2)明确IL一33的受体ST2是否在角膜上皮细胞中存在并探讨ST2的功能。(3)探讨IL一33／ST2信号通路在调节角膜上皮细胞产生炎症因子过程中的作用。方法：(1)分别用不同的病毒或细菌成分作为TLRs的配体刺激人角膜组织或原代培养的角膜上皮细胞，提前2h加入不同的抑制剂，探索不同配体诱导角膜上皮细胞产生IL-33的机制和具体的信号通路。(2)用外源性合成的人工L一33刺激人角膜组织或原代培养的角膜上皮细胞，提

2、前2h加入不同的抑制剂，检测受体ST2在角膜上皮细胞的表达、定位以及寻找IL一33通过ST2及其下游的相关信号通路诱导角膜上皮细胞相关炎症因子产生的机制。(3)用荧光定量PCR检测mRNA的表达，用酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫组织化学染色、免疫荧光染色Westernblotting检测蛋白水平的产物。结果：(1)分别从mRNA水平及蛋白水平证实了TLR3—7的配体都可以刺激人角膜上皮细胞产生工L一33，其中TLR3的配体polyl：C和TLR5的配体flagellin是相对较强的IL-33诱导剂。(2)IL一33的前体蛋白通常存在于细胞内，被AT

3、P激活后就从胞内分泌到细胞外。(3)Polyl：C诱导的工L一33可以被TLR3抗体或TRIF抑制剂阻断；而flagellin诱导的IL一33可以被TLR5抗体或MyD88抑制剂阻断。(4)IKB—Q抑制剂BAYll-7082或者是NF—KB激活抑制剂喹诺唑啉都可以通过阻断NF-KBp65进而抑制Polyl：C或flagellin刺激角膜细胞产生的IL一33。(5)在供体人角膜组织及原代培养的角膜上皮细胞中均发现IL一33的受体ST2的表达。并且IL-33刺激角膜上皮后ST2在mRNA及蛋白水平均有所增加。(6)外源性合成的IL-33在mRNA和蛋白水平

4、均可以刺激角膜上皮细胞产生炎症因子(TNF—Q，IL-IB，IL-6)和趋化因子IL一8，并且这种刺激可以被ST2中和抗体或分泌型ST2阻断。(7)IKB—Q抑制剂BAYll-7082或者是NF—KB激活抑制剂喹诺唑啉都可以阻断NF-KBp65蛋白的磷酸化和核转移，并且阻断IL一33刺激角膜上皮细胞产生的炎症因子。结论：(1)微生物配体通过TLR受体介导的信号通路刺激角膜上皮细胞产生上皮源性的的炎症因子IL-33，提示角膜上皮细胞在Th2支配的免疫性炎症中起重要作用。(2)ST2表达于角膜上皮，并且工L～33／ST2信号通路在调节IL一33介导的角膜上皮

5、细胞炎症反应过程起重要作用。博士研究生林静(眼科学)指导教师赵桂秋教授关键词：白细胞介素33；ST2；Toll样受体；免疫反应；角膜上皮Abstract4IIIIIIIMII{IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIlY2338992ObjectiveInterleukin(IL)33hasbeenrecentlyidentifiedasaligandtotheST2receptorthatmediatesTh2一dominantallergicinflammation．(1)ThepurposeofthisstudyWastoexploret

6、heroleoftoll-likereceptor(TLR)-mediatedinnateimmunityinIL．33inductionbymucosalepithelium．(2)ToidentifythepresenceandfunctionofST2andexploretheroleofIL一33／ST2signalinginregulatingtheinflammatorycytokineproductionincornealepithelialcells．Methods(1)Humancornealtissuesandculturedprim

7、aryhumancornealepithelialcells(HCECs)weretreatedwithavarietyofviralorbacterialcomponentswithoutorwithdifferentinhibitorstoevaluatetheIL-33regulationandsignalingpathways．(2)Humancornealtissuesandculturedprimaryhumancomealepithelialcells(HCECslweretreatedwithIL．33indifferentconcent

8、rationswithoutorwithdifferentinhibitorst