伏马菌素B1对HL-7702细胞周期的影响.doc

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1、伏马菌素B1对HL-7702细胞周期的影响研究刘莎孙桂菊作者单位：210009南京，江苏省南京市丁家桥路87号东南大学公共卫生学院营养与食品卫生系。E-mail：quicksandls@gmail.com,Tel:025-83272567，13851475641通讯作者：孙桂菊,E-mail：Guiju.sun@gmail.com王少康（东南大学公共卫生学院营养与食品卫生学系，南京，210009）【摘要】目的从细胞周期调控角度探讨伏马菌素（FB1）在人正常肝细胞增殖中的作用，并从分子水平上对细胞周期调

2、控因子及调控通路加以研究旨在阐明FB1诱导细胞周期作用的分子机理。方法以0.0μM、0.1μM、1.0μM、10.0μM、100.0μM剂量的FB1处理人正常肝细胞株HL-7702细胞24h、48h、72h、96h，检测细胞增殖（MTT法）、乳酸脱氢酶（LDH）释放率（比色法）、细胞周期分布（流式细胞分析术）、CyclinE及p21mRNA表达的变化（RT-PCR法）、CyclinE及p21蛋白表达的变化（Westernblot法）。结果同剂量组随处理时间的延长大体呈现出抑制率逐渐加大而后又减少，最后

3、逐渐促进细胞生长的态势，各浓度组的最高抑制率集中于48h至72h之间；各剂量FB1处理细胞48h时与对照组相比发生了G0/G1期阻滞，说明具有抑制细胞增殖的作用；但各剂量组中随着处理时间的延长，G0/G1期的比例呈先升高后降低的趋势，且随着处理剂量的增加这种变化幅度增加。RT-PCR检测发现FB1降低了CyclinEmRNA的表达，同时增加了P21mRNA的表达使得细胞增殖在48h至72h发生抑制；随着处理时间延长至96h，P21mRNA表达减少，促使细胞由生长受抑制发展为促进生长。当低剂量（0.1μ

4、M）FB1处理时，CyclinE蛋白表达的变化可能对细胞活力影响较大，而高剂量（1.0μM和10.0μM）FB1处理时，可能P21蛋白表达的变化对细胞活力影响较大。结论随处理时间的延长FB1通过影响人正常肝细胞HL-7702CyclinE和p21基因mRNA表达和蛋白表达，使G0/G1期细胞数目减少，改变了细胞周期分布，对HL-7702细胞产生先微弱抑制后促进生长的作用。我们的结果提示FB1可能通过影响细胞周期调控因子的表达及细胞周期的变化，在其致癌作用中发挥一定作用，为进一步研究FB1的致癌机制提供

5、参考。【关键词】伏马菌素B1，HL-7702,细胞周期，CyclinE,p21EFFECTSofFUMONISINB1onCELL-CYCLEofHL-7702CELLLIUSha,SUNGui-juAbstract:ObjectiveTheaimsofthisthesisaretoprobeintotherolesoffumonisinB1(FB1)inthecellproliferation,cell-cycleofHL-7702(akindofhumannormallivercellline)a

6、ndtounderstandthemolecularmechanismsoftheserolesbydetectingsomecell-cyclerelatedfactors’geneandproteinexpression.MethodsTheHL-7702cellwasculturedroutinely,andintervenedwithFB1variousconcentration(0.0μM、0.1μM、1.0μM、10.0μM、100.0μM)anddifferenttime(24h,48h

7、,72hand96h)respectively.ThecytotoxicityofFB1onHL-7702cellwasdetectedusingMTTbioassayandLDHintheculturefluid.Cellcycleanalyseswereperformedusingflowcytomete.TheexpressionofmRNAwasanalyzedbysemiquantitativeRT-PCRandtheexpressionofproteinwasdeterminedbyWes

8、ternBlot.ResultsTheinhibitionrateofHL-7702activityinducedbyFB1firstincreasedgraduallythendecreasedwiththetimeineveryconcentrationtreatment,whichhasthehighestinhibitionratebetween48hand72h.Thecellphasicdistributionincellcyclechang