星形胶质细胞trpm2通道在lps腹腔注射致小鼠脑内炎症中的机制研究

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1、星形胶质细胞TRPM2通道在LPs腹腔注射致小鼠脑内炎症中的机制研究⑧论文作者签名：指导教师签名论文评阅人1：评阅人2：评阅人3：评阅人4：评阅人5：答辩委员会主席：委员l：委员2：委员3：委员4：委员5：匿名评审答辩日期：2013年11月26日浙江大学研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得逝鎏盘堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志

2、对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期：二哆年／1月砧日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解逝望盘堂有权保留并向国家有关部门或机构送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权逝姿盘鲎可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：签字目期参哆年11月以日签字浙江大学博士学位论文中文摘要星形胶质细胞TI冲M2通道在LPS腹腔注

3、射致小鼠脑内炎症中的机制研究浙江大学医学院博士研究生导师中文摘要儿科学朱涛舒强教授脓毒性脑病(s印sis．associatedencephalopamy，SAE)是感染后全身炎症反应所致的弥漫性大脑功能障碍和意识改变，是多脏器功能不全综合征(multipleorgandys劬ctionsyndrome，MODS)的重要组成部分及患者预后不良的独立危险因素。SAE的病因和病理机制非常复杂，以白细胞浸润、神经元细胞变性坏死、星型胶质细胞和小胶质细胞激活为标志的炎症反应起到了重要的作用。其中星形胶质细胞在中枢神经系统

4、损伤后呈现保护或毒性作用的“双相”性及活化的时空性特点和SAE的临床表现有很好的契合性。星形细胞激活后出现反应性胶质化(reactivegliosis)、增殖迁移等状态，胞内游离Ca2+浓度的升高起了重要作用。星形细胞过度活化可诱发凋亡，其中定位于线粒体参与非caSpase依赖凋亡途径的BNIP3脚F／EndoG通路介导神经凋亡亦被证实和钙超载有关．瞬时感受器电位M2型(TmsientR．eceptorPotential2Channels，TI心M2)通道是位于细胞膜上的一种多功能钙离子通透性的非选择性阳离子通

5、道，通过调节胞内钙离子浓度可以调节氧化应激或再灌注等病理损伤中的细胞死亡．Tl冲M2通道很可能参与调节了LPS诱导的星形胶质细胞的活化和凋亡。本研究通过建立LPS腹腔注射致小鼠脑内炎症的模型及引入n心M2基因敲除小鼠，研究脓毒症在小鼠脑内的炎症改变及星形胶质细胞增殖和胶质化的时间规律，TI冲M2在LPS致炎小鼠脑内星形胶质细胞增殖和胶质化的调节作用及参与BNIP3胤F／EndoG介导LPS致炎小鼠海马区神经细胞的III浙江大学博士学位论文中文摘要凋亡；以及通过星形胶质细胞培养及TRPM2．siIⅢA转染，进一步

6、研究LPS是否可以诱导星形胶质细胞的适应性表达，以及n冲M2．siI矾A转染是否可以有效抑制LPs诱导的体外星形胶质细胞的活化和致炎性细胞因子n师．o【、IL．1p、IL一6的分泌。从而明确星形胶质细胞TI冲M2通道与脓毒性脑病的关系和分子机制，期待为防治脓毒症及脓毒性脑病提供理论依据。目的：研究LPs致炎后野生型和基因敲除(n心M2小)小鼠的一般行为学、脑内炎症改变、星形胶质细胞活化、促炎因子分泌及凋亡的差异；同时研究LPs诱导后星形胶质细胞TRPM2的表达特点及基因沉默后的差异，探讨LPs致炎对小鼠星形胶质

7、细胞的活化影响、诱导TRPM2的适应性表达及TRPM2通道在星形胶质细胞活化中的作用及对神经细胞凋亡的影响。方法：1．动物模型：成年雄性c57BL／6小鼠野生型小鼠分别腹腔注射LPs5mg／l【g、10mg／l【g、25峨、50n呜俺、75mg瓜g、100mg瓜g；对照组注入等量生理盐水。监测小鼠体温、神经行为学改变、惊厥发作、摄食改变及死亡率；24h后取脑HE染色观察神经元及胶质细胞病理变化特点和观察脑膜、脑室及脑实质炎症反应；免疫荧光检测小鼠海马区GFAP阳性细胞数量；TUNEL法检测小鼠海马区神经细胞凋亡

8、。2．在体实验：成年雄性C57BL／6小鼠野生型及同种系TI心M24小鼠分别腹腔注射LPS50mg／l【g；对照组注入等量生理盐水，监测小鼠一般神经行为学改变、死亡率；并于注射后12h，24h，48h时间点取小鼠脑组织，通过免疫组化、Westemblot方法检测LPS致炎后12h，24h，48h时间点野生型及n冲M24小鼠大脑海马区GF：AP和n冲M2的表达变化和差异；荧光定量RT-P