紫杉醇作用机理及多药联合对卵巢癌skov3细胞抑制作用

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1、中文摘要紫杉醇作用机理及多药联合对卵巢癌SKOV3细胞的抑制作用摘要目的：紫杉醇(paclitaxel，PTX)是卵巢癌化疗的一线药物，铂类联合PTX已经成为晚期卵巢癌的标准化疗方案。患者无疾病进展生存刚．I、司及总生存时间得以改善，但复发和耐药问题依然严重，长期生存率并未提高。最近，寻找一种与PTX、铂类均无交叉耐药且疗效确切的药物与之配伍治疗晚期卵巢癌成为热门研究课题。足叶乙甙(etoposide，VP．16)为拓扑异构酶II(topoisomerase，TopoII)抑制剂，单独用于二线化疗治疗卵巢癌有效率为25％。本实验旨在探讨PTX、顺铂(cisplatin，CDDP)联

2、合应用及加入VP．16后三药联合对卵巢癌细胞株SKOV3的抑制作用，为临床配伍用药提供理论参考。PTX的抗癌机理除了作用于微管系统外，还与其诱导肿瘤细胞凋亡有关。从生化水平来看，细胞凋亡的特征与特异性的酶学作用分不开，研究其酶学变化，是认识细胞凋亡的重要途径。其中TopoII和半胱氨酸蛋白酶(caspase)家族的效应酶caspase一3是与细胞凋亡有关的酶类。本文旨在探讨紫杉醇对TopoII和caspase．3的表达有无影响，研究其抗癌机理。方法：1．细胞培养：SKOV3细胞以RPMI一1640培养基培养，内含10％新生牛血清、青霉素100U／m1、链霉素100¨g／ml，置37

3、℃、5％C02环境下培养。2．测定药物的半数抑制浓度(IC，o)：用对数生长期细胞进行实验。实验组分中文摘要别加入经无血清培养液稀释的PTX、CDDP及VP．16至终浓度为O．5“∥ml～l6p∥ml、2．8pg／ml～89．6肛∥ml及11．4u∥ml～364．8ng／ml，均为倍比稀释。同时设对照样品。不同药物及浓度均为3复孔。培养24h后MTT检测抑制率，然后根据MicrosoRExcel软件给出的相应公式求出IC50值。3．两药联合及三药联合用药效应：根据药物的IC，o值确定药物作用浓度。①PTX单用组：分别以PTX的1／10IC50、1／2IC50、IC50浓度作用于细胞

4、。②两药合用组：以CDDP的1／4IC50浓度分别与PTX的上述浓度合用。③三药合用组：以VP一16的1／4IC50浓度分别加入上述两药合用后的各浓度。药物作用时间均为24h，观察合用效应。同时设对照样品。计算抑制率，步骤同上。按金氏公式分析药物合用效应。4．应用免疫细胞化学染色法(S—P法)检测PTX的1／2IC50、IC50浓度作用于SKOV3细胞后Topoll0【及caspase一3表达的变化，探讨药物作用机理。5．应用原位杂交技术检测各实验组细胞中T0pollocmRNA表达的变化，从转录水平探讨药物对Topolloc表达的影响。6．统计学处理：采用SAS6．12软件包对数

5、据进行统计学处理，计量资料用x土s表示，采用f检验，分类资料采用秩和检验。判定标准：p

6、16(+)。由此可见，中文摘要PTX在1／2IC50浓度时与各药协同效果最好。3．免疫细胞化学染色结果：Topolloc主要表达于细胞核，呈棕黄色。在未用药的SKOV3细胞中Topoll0【呈较强阳性染色，经PTx处理24h后染色明显减弱(尸<0．05)。caspase一3在未用药的SKOV3细胞浆-巾少量表达，经各浓度PTX处理后表达增高(尸O．05)。结论：1．PTx对卵巢癌SKOV3细胞抑制作用显著，与CDDP合用具有协同作用，加入VP一1

7、6后抑制作用进一步加强。临床三药联合应用有望提高疗效。2．PTX能下调SKOV3细胞中Topoll0【的表达，上调caspase一3的表达，这也许是紫杉醇抗癌机制之一。3．PTX对SKOV3细胞中Topoll0【m】王NA的表达无影响，说明并非通过干预Topoll0【的转录环节而影响其功能。关键词：卵巢肿瘤；紫杉醇；顺铂；足叶乙甙；拓扑异构酶II；caspase一3英文摘要——————————————————————————————————————————————一—