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1、第47卷第6期厦门大学学报(自然科学版)Vol.47No.62008年11月JournalofXiamenUniversity(NaturalScience)Nov.2008Microtox技术在印染废水污染监测中的应用研究111,23王宾香,王慧,郑天凌(1.厦门大学生命科学学院,应用与环境微生物研究所,2.近海海洋环境科学国家重点实验室(厦门大学),福建厦门361005)摘要:利用发光细菌毒性检测技术(Microtox)研究了Microtox技术对印染废水毒性检测的条件,活性染料及降解中间产物对发光细菌的毒性反
2、应,并对柠檬酸杆菌降解活性染料降解过程进行了监测.结果表明:Microtox技术可以有效地监测活性染料及其微生物降解中间产物的相对毒性;活性染料的毒性远大于代谢途径中间产物的毒性;活性染料降解过程中培养液萃取物的毒性逐渐降低,但上清液的毒性出现先下降而后又增大的趋势,推测是上清液中存在的中间产物和其它组成成分及pH变化综合作用的结果.关键词:发光菌;Microtox技术;生物毒性;环境检测中图分类号:X172文献标识码:A文章编号:043820479(2008)0620869205当前活性染料以其色泽鲜艳、固色率高
3、、染色牢度氢钾3g,氯化铵0.5g,氯化钠0.5g,二水合氯化钙4好等特点成为应用最广的一种染料,然而印染行业中mg,硫酸镁0.12g,维生素B10.15mg,葡萄糖8g,蒸所产生的大量未处理的或处理未达标废水通过地面径馏水1000mL,染料50mg.本研究所用的印染废水均流、污水排放等方式进入江河湖海等环境中.这些印染为模拟印染废水.废水潜在的毒性、致癌性和致畸致突变作用[1-2],对江[8]1.2发光菌菌液的制备河湖海、生态环境具有重大的潜在危害,因此世界各国液体培养基:胰蛋白陈5g,酵母浸出汁5g,NaCl的
4、环保部门对染料生产及使用厂家排放水的毒性提出30g,Na2HPO45g,KH2PO41g,甘油3g,蒸馏水了严格的限制要求.目前发光细菌毒性检测技术,即1000mL,pH7.0.Microtox技术已渐成为一种公认的微生物检测物质固体培养基:培养液l000mL,琼脂粉16g.毒性的有效技术,与传统方法相比,它具有方法可靠、斜面菌种培养:将发光菌冻干粉用0.5mL2.5%检测快速等特点,在环境检测方面得到广泛应NaCl溶液悬浮,转入50mL培养液(250mL锥形瓶)[3-7,18]用.本文在监测柠檬酸杆菌降解印染废水
5、中蒽中,20℃恒温摇床振荡培养24h后转接于固体培养基醌染料和偶氮染料的过程中,首次采用了Microtox技(试管斜面),经20℃培养24h为第一代斜面菌种;第术,研究了蒽醌染料和偶氮染料及其降解产物的生物一代斜面菌种再转接于固体培养基,经20℃培养12h毒性反应,为印染废水环境的生物修复提供了理论依后为第二代斜面菌种,备用.冰箱保存的菌种同样需经据.活化两代后备用.摇瓶菌液培养:取第二代斜面菌种,接入50mL1材料与方法培养液(250mL锥形瓶)中,20℃摇床振荡培养12～1.1材料14h(120r/min).菌
6、种:柠檬酸杆菌CK3(Citrobacterck3)由本实菌液制备:取一定量上述培养液,用3%NaCl溶验室保存.液稀释,稀释液的初始发光度在600～1000mV之明亮发光杆菌(Photobacteriumphosphoreum)由间,将稀释液放入摇床不断振荡充氧待用.中科院南京土壤研究所提供.1.3柠檬酸杆菌CK3降解模拟印染废水实验模拟印染废水:十二水硫酸氢二钠31.7g,磷酸二将柠檬酸杆菌CK3转接入LB培养基活化6h左右,然后将活化菌液(OD=0.2)转接入模拟印染废水收稿日期:2007212212中进行厌
7、氧培养.基金项目:福建省重大专项前期研究项目(2006YZ1023),厦门市[9-10]1.4待测样品萃取物科技计划项目(3502Z20073009)资助3通讯作者:microzh@xmu.edu.cn培养液在8000g下离心15min,去除上清液,用·870·厦门大学学报(自然科学版)2008年二氯甲烷萃取,经无水硫酸钠脱水,高纯氮吹脱二氯甲烷后,于3%NaCl溶液中制成毒性测试液.待测上清液:培养液在8000g下离心15min,去除微生物细胞得到.1.5毒性检测取2mL用3%NaCl稀释好的测液于具塞磨口比色管
8、(直径1.2cm,高5cm)中,每个浓度组做三个重复.迅速取0.05mL稀释菌液于各比色管中,加塞上图1pH对发光菌相对发光度的影响Fig.1EffectofpHonrelativeluminosity下振摇10次,去塞,15min后将比色管插入生物毒性测试仪中,进行发光强度的检测(以仪器中光电倍增管受光量子感应后产生的微电流mV为信号,计量发光量),并以培
