小麦及其部分近缘种属puroindolines蛋白的分离与检测

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1、农业生物技术学报JournalofAgriculturalBiotechnology2005,13(5):587~591·研究论文·郅小麦及其部分近缘种属puroindolines蛋白的分离与检测*郅郅常成李保云尤明山李卫华师凤华刘广田**郅(中国农业大学农业与生物技术学院，北京100094)郅邾摘要：通过对104份普通小麦()及其近缘种属材料puroindolines蛋白(包括PinA和PinB)的初步研究，提出一种改进的Urea-SDS-PAGE凝胶系统用于此蛋白的分离和检测。结果表明，和普通的SDS-PAGE相比，可以清晰地分开PinA

2、和PinB,分辨率较高，检测效果较好。改进的凝胶系统也可用于其它蛋白，特别是小分子量且等电点和分子量相近蛋白组分的分离和检测。在所分析的材料中，普通小麦的PinA和PinB蛋白变异较丰富，斯卑尔脱小麦(ssp.)、密穗小麦(ssp.)、西藏半野生小麦(ssp.)和山羊草()中未发现变异；野生二粒小麦(var.)、长穗偃麦草()未检测出puroindolines蛋白。邾关键词：小麦；籽粒硬度；puroindolines；Urea-SDS-PAGE凝胶系统郅郅SeparationandSurveyofPuroindolineProteins郅in

3、CommonWheatandItsRelatedSpecies郅郅CHANGChengLIBao-YunYOUMing-ShanLIWei-HuaSHIFeng-HuaLIUGuang-Tian**郅郅邾AnimprovedUrea-SDS-PAGEwasusedtoseparatepuroindolineproteins(PinAandPinB)in104commonwheat()anditsrelatedspecies.Theresultsindicatedthatthepuroindolineproteinscouldbedisting

4、uishedandsurveyedmoreefficientlybyUrea-SDS-PAGE,thanstandardSDS-PAGE.TheUrea-SDS-PAGEalsocouldbeusedforotherproteins’separa-tions,especiallyforthosewithsimilarpIandmolecularweight.TheallelevariationsofPinAandPinBwererichincommonwheatbutnovariationswerefoundinTibetsemi-wildw

5、heat(ssp.),Speltwheat(ssp.),Compactwheat(ssp.)andAegilops().InwildEmmer(var.)andThinopyrum(),puroindolinesproteinswerenotpresent.邾commonwheat;kernelhardness;puroindolines;Urea-SDS-PAGE郅籽粒硬度是国际上通用的小麦(friabilin为一复合性多肽，其中2种主要的多肽(分)市场分类指标之一，是决定加工品质的主要别为puroindoline-A，PinA和puroi

6、ndoline-B，PinB)因素，因此是小麦品质改良的重要目标性状(Dubreil与籽粒硬度密切相关，分子量接近(13~14kD左右)，.,1998)。遗传研究表明硬度由1个主效基因两者仅相差0.7kD；等电点也很相近(为10.5和()和一些微效基因控制，主效基因位于普通小麦10.7)，属于强碱性蛋白；按1颐1的比例构成friabilin5DS上，软质(Ha)对硬质显性，而微效基因存在于染蛋白的主要成分，其氨基酸相似性高达60%(Autier色体2A、2D、5A、5B、6D、7A上(Campbell.,.,1994;Blochet.,199

7、3)。邾1999;周艳华等2002)。邾PinA和PinB(通称为puroindolines)蛋白是一类小麦籽粒硬度的生化基础的研究是从friabilin脂膜蛋白，富含半胱氨酸，通过其色氨酸结构域的蛋白的发现开始的(Morris.,1994)。研究表明，琢-螺旋形成的膜固着环与淀粉表面的双分子极性*基金项目：国家自然科学基金(No.21021453)资助。郅常成：男，1975年生，博士研究生。郅**通讯作者。Authorforcorrespondence.E-mail:.郅收稿日期：2004-10-08接受

8、日期：2004-12-28PDF文件使用"pdfFactoryPro"试用版本创建www.fineprint.cn588农业生物技术学报2005年脂紧密结合，削弱胚