溶藻菌发酵液及其溶藻产物的生物急性毒性试验

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1、生态环境学报2012，21(5)：913．918http：~wwwjeesci．comEcologyandEnvironmentalSciencesE-mail：editor@jeesci．com溶藻菌发酵液及其溶藻产物的生物急性毒性试验孔赞，朱亮，徐向阳L，戚韩英，陆慧锋1．浙江大学环境工程系，浙江杭州310058；2．浙江大学一西澳大学水环境综合管理与保护联合研究中心，浙江杭州310058摘要：应用发光细菌(Photobacteriumphosphoreum)急性毒性试验，研究了溶藻菌(Streptomycessp．HJC．D1)发酵液及其对铜绿微囊藻(

2、Microcystisaeruginosa)抑制产物的生物急性毒性。结果表明，溶藻菌发酵液本身对发光细菌具有一定的低毒性，发酵3～5d时其相对发光度为(67．59％4-3．11％卜(72．35％+2．76％)；体积分数5％的溶藻菌发酵液可有效抑制初始质量浓度高达(O．14834-0．0032)mg-L。的铜绿微囊藻生长，其抑藻率达85％以上，且藻液毒性明显低于对照组；以微囊藻毒素为主要溶藻产物进行毒性试验发现，其半抑制质量浓度为1096．92·L～，水体藻毒素质量浓度低于20g·L时其生物毒性较低。关键词：溶藻菌；铜绿微囊藻；溶藻产物；生物急性毒性；藻毒素中

3、图分类号：X171．5文献标识码：A文章编号：1674．5906(2012)05．0913—06据调查，我国城镇饮用水多取自湖泊、水库，(Photobacteriumphosphoreum)T3变种购于中国科学但由于水环境污染日益加剧以及水源地保护力度院南京土壤研究所。不够，导致湖库水体富营养化严重，其中水源地营1．1．2培养基养化带来的危害极为严峻⋯。目前，成熟的环境水放线菌用高氏一号培养基[1；铜绿微囊藻用体控藻技术大多采用化学法，因其运行成本高、二培养基(BG11)，配方由中国科学院水生生物研究所次污染风险大，实际应用存在诸多问题。生物控藻提供；发光细

4、菌菌液制备方法参见文献[。则具有环境友好型、专一性强、成本较低等优点，1．1．3微囊藻毒素fMc—LR)已成为近年来水环境修复领域的研究重点之一，并MC—LR标准样品购于瑞典Alexis公司(分子式将其用于水华和赤潮防治[24。。已有研究报道，病毒、C49H74N1oO12，分子量995．12g，纯度>95％)。标准细菌及真菌等均能够有效抑制蓝藻水华的爆发【3】，样品200Pg用超纯水定容至100mL，．20℃保存；但有关溶藻机理及溶藻产物毒理学研究不多。用前分别稀释至相应质量浓度；课题组前期从杭州某富营养自然水体分离获1．1．4其他试剂得一株溶藻菌Stre

5、ptomycessp．HJC—D1，其发酵液硫酸铜购于上海振欣试剂厂(分析纯)。对铜绿微囊藻具有明显抑制作用。鉴于饮用水安全1．2仪器是全世界一直以来关注的焦点，结合已在工业废水DXY．2型生物毒性(污染)测试仪(中国科学院[5-101、受污染自然水体[11-16等处应用的发光细菌法，南京土壤所)；YXQ—LS．SII型立式压力蒸汽灭菌器以产毒藻株铜绿微囊藻(Microcystisaeruginosa)为(上海博迅实业有限公司)；UV．2401PC型紫外可见对象，研究了溶藻菌(Streptomycessp．HJC．O1)发酵分光光度计(日本Shimadzu公

6、司1。液及其对铜绿微囊藻抑制产物的生物急性毒性以1．3试验方案期为开发湖库富营养化和饮用水安全保障新技术1．3．1溶藻菌培养及其发酵液制备提供理论依据。采用高氏一号培养基，28℃培养3~4d；发酵1材料和方法液制备采用液体培养基，150r·min摇床培养4d1．1材料后静置取上清液备用。1．1．1菌种1．3．2不同发酵时间的茵液急性毒性试验溶藻菌(Streptomycessp．HJC—D1)由本实验室分别取不同发酵时间(1～6d)的发酵液，经O．45分离并保藏；铜绿微囊藻(Microcystisaeruginosa)一905购于中国科学院水生生物研究所藻m微

7、孑L滤膜过滤后，用3％NaCI稀释配制成不同种保藏中心，经活化后于光照强度2000lux、光暗质量浓度梯度，每个质量浓度设3组平行，以3％比14：10，25℃条件下培养；明亮发光杆菌NaC1作为空白对照。基金项目：国家科技支撑计划项目(2006BAJO8B01；2012BAJ25B07)；浙江省教育厅科研项目(Y200909172)作者简介：孔赞(1983年生)，男，博士研究生，主要从事环境污染生物修复研究。’责任作者，教授，E．mail：ky020241@yahoo．tom．el收稿日期：2012．03．12914生态环境学报第21卷第5期(2012年5月

8、)1．3．3不同发酵液投加比例对溶藻产物的急性毒RL