遗传性多发性骨软骨瘤致病基因突变的分析

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1、中图分类号R68分类号UDC610硕士学位论文学校代码!Q53三密级公珏遗传性多发性骨软骨瘤致病基因突变的分析Theanalysisofpathogenicgenemutationinhereditarymultipleosteochondroma作者姓名：戴瑜亮学科专业：临床医学研究方向：外科学学院(系、所)：湘雅二医院指导教师：王冰教授答辩委员会主席中南大学二。一三年五月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表

2、或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：眺址年￡月严曰学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签师签飙蚣匀孚

3、日硕士学位论文中文摘要摘要遗传性多发性骨软骨瘤致病基因突变的分析遗传性多发性骨软骨瘤(hereditarymultipleosteochondroma)又称遗传性多发性外生骨疣(hereditarymultipleexostoses，lIME)，是骨骼系统常见的常染色体显性遗传病。本病以骨表面有软骨帽的骨隆突形成为特征，常伴有关节疼痛、运动受限、长骨形态异常、瘤体压迫邻近血管神经等并发症，并有一定几率恶变成软骨肉瘤(恶变率约O．5％．5％)。有研究表明HME具有遗传异质性，其发病机制与EXT基因突变有关。EXT基因家族主要由EXTl

4、、EXT2、EXT3和具有具有相同羧基端编码产物的EXTLl、EXTL2及EXTL3所组成。EXT突变引起Ihh、Wnt、BMP等信号传导通路异常，影响软骨细胞增殖分化，从而导致骨软骨瘤的形成。大量研究报道提示多数HME患者的致病基因与EXTl和EXT2有关，而与EXTL有关的基因突变尚未有在任何HME患者中发现。因此，除上述的EXTl和EXT2的基因突变外，是否在EXT基因存在的新的突变，仍待进一步研究。目的：通过PCR检测技术，对1个遗传性多发性骨软骨瘤家系进行EXTl及EXT2的基因突变筛查，初步掌握PCR及测序等致病基因突变

5、筛查的方法，以分析遗传性多发性骨软骨瘤发病机制中相关基因突变情况，并为进一步分析突变基因所产生的功能变化提供依据。方法：收集来自湖南娄底的一例遗传性多发性骨软骨瘤家系。该家系共4代，21人，患者7人。其中收集血液标本3个，提取DNATI硕士学位论文中文摘要并样本浓度标准化后，使用primer3在线软件设计引物，共设计20对引物，根据引物的设计参数，应用PeR扩增EXTI及EXT2基因的热点编码区及外显子侧翼序列，再使用聚丙烯酰胺凝胶电泳对产物进行验证，最终对PCR产物进行直接测序。通过DNAstar软件分析测序结果，将发现的变异在d

6、bSNP数据库进行比对分析以排除SNP位点。结果：我们选择对家系内的患者(II：3，III：3，Ⅳ：2)针对遗传性多发性骨软骨瘤致病基因倒Ⅲ和E腰2进行突变筛查。通过PeR及测序，EXTI热点区域未发现任何变异；EXT2热点区域中发现3个SNP位点(rsl0769018、rs4755228、rsll037909)，未发现其它变异。结论：该家系该家系患遗传性多发性骨软骨瘤的致病基因存在于EXTl、EXT2热点区域之外。为进一步研究发现新的基因突变提供了可能，并且有利于下一步阐明EXT致病机制。关键词：遗传性多发性骨软骨瘤；EXTl；E

7、XT2；突变硕士学垡论奎一．墨塑-____———-——●●——————●______--_———_-___-—————————●__———_-——----_————____●_______———————一TheanalysisofpathogenicgenemutationinhereditaryAbstractmultipleosteochondromaHereditarymultipleosteochondroma，(aliashereditarymultipleexostoses)，isacommonautosomaldomi

8、nantinheritablediseaseofskeletalsystem．Thecharacterofthisdiseaseisthebonecartilageatthesurfaceofthecapwasformedfromth