小鼠缺血再灌注脑损伤中wntβ-catenin信号通路相关因子的表达及其与海马神经发生的影响

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1、贵阳医学院2013届硕士研究生论文《中国图书资料分类法》分类号：R743.31单位代码：10660045学号：10660s110045贵阳医学院2013届硕士学位论文小鼠缺血再灌注脑损伤中Wnt/β-catenin信号通路相关因子的表达及其与海马神经发生的影响研究生：罗时鹏年级：2011级导师：余资江教授专业：人体解剖与组织胚胎学2013年3月1日贵阳医学院2013届硕士研究生论文目录中文摘要„„„„„„„„„„„„„„„„3-5页前言„„„„„„„„„„„„„„„„7-8页第一部分材料与方法„„„„„„„„„„„„„9-17页结果„„„„„„„„„„„„„„„17-2

2、6页讨论„„„„„„„„„„„„„„„26-32页参考文献„„„„„„„„„„„„„„32-35页第二部分材料与方法„„„„„„„„„„„„„36-45页结果„„„„„„„„„„„„„„„46-51页讨论„„„„„„„„„„„„„„„51-53页参考文献„„„„„„„„„„„„„„53-54页英文摘要„„„„„„„„„„„„„„„„55-58页致谢„„„„„„„„„„„„„„„„„59页缩词表略„„„„„„„„„„„„„„„„„60页论文原创性声明„„„„„„„„„„„„„„61页附：综述„„„„„„„„„„„„„„„62-71页贵阳医学院2013届硕士研究生论文小鼠缺

3、血再灌注脑损伤中Wnt/β-catenin信号通路相关因子的表达及其与海马神经发生的影响专业：人体解剖与组织胚胎学研究生：罗时鹏导师：余资江中文摘要目的：初步探讨Wnt/β-catenin相关因子在缺血再灌注（ischemia-reperfusioninjury，IRI）小鼠海马中的表达规律及其对神经干细胞的增殖作用。方法：1、将160只1月龄健康雄性昆明小鼠随机分为正常组、假手术组、缺血再灌注后1d、3d、7d、14d、21d、28d组，通过夹闭小鼠双侧颈总动脉半小时再通的方法建立小鼠脑缺血再灌注损伤模型。分别对模型小鼠进行神经行为学、四肢协调性检查，同时运用Y-型电

4、迷宫检测小鼠脑缺血再灌注后记忆能力，并采用TTC染色观察脑缺血再灌注后小鼠脑梗死情况；尼氏染色和透射电镜观察海马区的形态结构变化；采用原位杂交法和免疫组织化学染色方法检测Wnt/β-catenin信号通路重要信号分子Wnt1、Wnt3a、β-catenin、cyclinD1、GSK3β的表达变化。2、将260只小鼠随机分为正常组，IRI后1d、3d、7d、14d、21d、28d+海马内注射生理盐水组；缺血再灌注后1d、3d、7d、14d、21d、28d+海马内注射pβ-catenin组，每组20只。海马内注射pβ-catenin组在模型建立后24h脑内注射pβ-cate

5、ninS33Y质粒。采用腹腔注射BrdU方法检测海马齿状回区NSCs增殖规律及通过Western-Blot检测不同时间点β-catenin、CyclinD1、GSK3β蛋白的表达水平；免疫组织化学染色观察各时间点β-catenin、CyclinD1、GSK3β的表达变化。结果：1、小鼠脑缺血再灌注损伤后与正常组、假手术组比较，在神经行为学、协调性及学习记忆能力等方面均有明显的缺失和障碍（P＜0.05），但随着时间延长其有一定恢复。2、形态学检测：①TTC染色显示正常组和假手术组脑组织无明显梗死灶，IRI组脑组织中梗死灶明显。②尼氏染色显示：IRI组随着灌注时间的增加，神

6、经细胞排列紊乱，核固缩，核溶解，颗粒细胞呈空泡样变性，尼氏小体溶解、消失，以21天组最为严重。③透射电镜显示IRI后7d组细胞内水肿，线粒体肿胀（空泡化，嵴断裂），内质网和高尔基体扩张，核固缩，核膜间隙扩3贵阳医学院2013届硕士研究生论文大。3、免疫组织化学检测：结果表明正常脑组织中β-catenin、cyclinD1表达均为阴性或弱阳性,GSK3β表达为阳性。IRI各组中β-catenin、cyclinD1阳性表达均显著高于正常组和假手术组，7~14d阳性达高峰（P＜0.05）。IRI各组中GSK3β阳性细胞至缺血再灌注后21d表达升高（P＜0.05）。IRI+NS

7、各组β-catenin、CyclinD1阳性细胞数明显多于正常组（P＜0.05），转染质粒组β-catenin、CyclinD1阳性细胞数均多于未转染组（P＜0.05），β-catenin以转染后7d组最为显著，CyclinD1在转染后14d组最为显著。IRI+NS组中GSK-3β阳性细胞数均低于正常组（P<0.01），转染质粒组均低于未转染组（P＜0.05），以转染后14d组最为显著。4、wnt1、wnt3a原位杂交检测结果显示，与正常组和假手术组比较，缺血再灌注各组均可见wnt1、wnt3a阳性细胞，再灌注后1d表达开始增加，14d达