红松松塔多糖膜分离制备工艺及其活性研究

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1、青岛科技大学研究生学位论文红松松塔多糖膜分离制备工艺及其活性研究捅要松塔作为林业副产品一度曾被忽视，近年随着对其研究的深入，人们逐渐意识到这种以往废弃的资源却含有重要的生理活性成分，它在免疫调节及癌症治疗等方面均显现出不容小觑的值得关注的功效，多糖是其主要活性成分之一。本课题针对红松松塔多糖的分析、制备和生物学活性等方面，进行了探索性研究，主要创新点如下：1建立了～种红松松塔多糖含量测定新方法一3，5．二硝基水杨酸比色法(DNS法)，文献中尚未见有同类工作报道。与其它多糖含量测定方法相比，该法不使用具有腐蚀性的浓硫酸，所用试剂稳定，而且不需要

2、对多糖进行繁琐的精制纯化过程，即可排除单糖和其它杂质成分的干扰。本实验中还对该含量测定方法进行了反应条件研究和方法学考察。结果表明，该方法操作简便，测定结果准确，重复性好，可用于红松松塔多糖的含量测定。2首次报道了将膜分离技术用于红松松塔多糖制备工艺的系统研究，采用煎煮法提取多糖，经浓缩后，用活性炭吸附等前处理方法去除提取液中部分杂质，再对提取液进行微滤进一步除去杂质、此后进行超滤分离纯化。首先，在预处理过程中，考察了活性炭吸附法的最优条件，实验结果表明，活性炭吸附可使料液中杂质含量显著降低，从源头着手控制膜污染的发生。其次，分别考察了微滤过

3、程中不同压力、浓度、温度下膜通量的变化趋势，结果显示：膜通量随压力、温度的升高呈上升趋势，随料液浓度的升高呈下降趋势，与理论知识相吻合。在此基础上进行了正交试验，获得了制备红松松塔多糖的微滤最佳工艺条件为：料液温度40。C，料液浓度259／L，操作压力0．10MPa。最后还采用超滤方法对微滤渗出液进行分离纯化，制得红松松塔多糖产物，超滤后多糖含量由超滤前的7．20％提高到44．70％，纯化效果显著。3实验中还采用不同截留分子量的超滤膜，对微滤后的料液进行分级分离，得到了不同分子量的多个红松松塔多糖组分，并通过分别测定其中红松松塔多糖的含量，得

4、出红松松塔多糖的分子量分布情况：分子量>lO万的占9．50％，5万．10万之间的占70．20％，1万．5万之间的占3．20％，6000一l万的占17．10％。该工作尚未见有文献报道。4本论文中还首次报道了红松松塔多糖的抑菌活性。实验结果表明，红松松塔总多糖对大肠杆菌、青霉及酿酒酵母均有～定程度的抑制作用，其中对青霉抑制作用最强。对金黄色葡萄球菌没有明显抑制作用。红松松塔总多糖水溶红松松塔多糖膜分离制备_T艺及其活性研究液对大肠杆菌的最小抑菌浓度均为0．5mg／mL；对青霉和酿酒酵母的最小抑菌浓度为0．25mg／mL。脱蛋白后的红松松塔总多糖对

5、供试菌的抑制作用较脱蛋白前有明显下降。不同分子量的红松松塔多糖对供试菌抑制作用不同，由强到弱依次为>10万、5万．10万、l万．5万，而分子量6000．1万的红松松塔多糖对供试菌无明显的抑制作用。对于分子量>10万和5万．10万之间的红松松塔多糖而言，其对供试菌的抑制作用为青霉>酿酒酵母>大肠杆菌，即二者对真菌的抑制作用大于细菌。而分子量l万．5万的红松松塔多糖对供试菌的抑制作用为大肠杆菌>青霉>酿酒酵母，即其对细菌的抑制作用大干真菌。除以上创新点之外，本实验中还对膜分离法和醇沉法制备红松松塔多糖的工艺进行了比较。结果显示膜分离法制备的红松松

6、塔总多糖样品多糖含量为44．70％，相比于醇沉法产物多糖含量23．88％有很大提高。另外通过膜分离工艺与水提醇沉工艺在生产成本、生产周期等多方面的比较，显示出了膜分离的诸多优势。目前，热水提取是多糖提取的主要方法，本课题还进行了该法与超声提取方法的比较研究。结果显示，与热水提取法相比，超声提取可以得到较高的多糖碍率和多糖含量，由此可知超声提取也是一种值得关注的提取方法，有待后续研究继续探讨。本文对红松松塔多糖的分析、制备及生物学活性等方面进行了探索性的研究，并取得了明显进展，期望能为相关工作的深入研究提供参考。关键词：红松松塔，多糖，DNS法

7、，微滤，超滤，抑菌活性，分子量青岛科技大学研究生学位论文STUDY0NPREPARATIONPROCESSOFMEMB&ANESEPERATIONTECNOLOGY,ANDBACTERIOSTASISOFPINUSKORAIENSISCORNP0【YSACCHARIDEABsTRACTKoraiensiscOrnS，asbyproductsofagriculturalproductsprocessingit’dustry,wereonceignoredbypeople。Inrecentyears，peoplebecameawareofthat

8、theresourcewhichwasbeenwasted，hadimportantphysiologicalactivitywithfurtherresearch